[发明专利]一种Cap2结构5′帽子类似物及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种Cap2结构5'帽子类似物及其制备方法，属于基因工程技术领域，所述Cap2结构5'帽子类似物的分子式如下：3′‑O‑Me‑m7G(5')ppp(5')(2'OMeA)p(2'OMeC)。本发明提供的Cap2结构5'帽子类似物具有更高的合成效率、更高的加帽效率、更低的免疫原性和更高的蛋白翻译效率。

本申请是申请日为2020年08月20日、申请号为202010842263.2、发明名称为《一种Cap2结构5′帽子类似物及其制备方法》的分案申请，申请人深圳市瑞吉生物科技有限公司。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种Cap2结构5′帽子类似物及其制备方法和应用。

背景技术

翻译效率和免疫原性是mRNA药物行使功能的两大关键因素。自体免疫蛋白如RIG-I和IFIT识别异常加帽的mRNA，降低了外源mRNA在细胞内的活性和半衰期，使得mRNA药物在体内难以发挥作用。因此，优化mRNA帽结构对于提高mRNA的生物活性和降低免疫原性是至关重要的。

目前在体外合成带帽的mRNA有两种方法，第一种是mRNA转录后使用牛痘病毒加帽酶对其进行加帽，产生带Cap 0或Cap 1的RNA，这种加帽方法很高效，但是产量不稳定，价格也很昂贵。此外酶促加帽法不能产生Cap 2和m6Am的帽子。第二种方法是转录过程中加入过量的帽结构类似物来进行加帽。截至目前，最常用的帽结构类似物是ARCA，使用ARCA可产生具有免疫原性的Cap 0，但是加帽效率只有70％。该方法的产量也比较低，每毫升转录反应体系最多制备1.5mg RNA，转录产物具有很高的免疫原性。另一种叫做Cleancap的共转录加帽的方法也被广泛采用。Cleancap属于Cap 1，与ARCA使用二聚体(m7GpppG)启动T7转录不同，CleanCap使用三聚体(m7GpppAmG)启动T7转录。该方法的产量比较高，每毫升转录反应体系制备4mg加帽的RNA，加帽效率可达90％，其转录产物的免疫原性低于ARCA。

基于现有mRNA合成体系中的帽结构类似物的加帽率低，单位合成体积内mRNA产量低以及免疫原性高等缺点，从而研发了Cap2帽结构类似物，既弥补了以上应用上的缺点，又大大提升了蛋白翻译效率。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种Cap2结构5′帽子类似物及其制备方法和应用，本发明提供的Cap2结构5′帽子类似物具有更高的合成效率、更高的加帽效率、更低的免疫原性和更高的蛋白翻译效率。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种Cap2结构5′帽子类似物，所述Cap2结构5′帽子类似物的分子式选自以下任一种；

m7G(5′)ppp(5′)(2′OMeA)p(2′OMeG)；

m7G(5′)ppp(5′)(2′OMeG)p(2′OMeG)；

m7G(5′)ppp(5′)(2′OMeC)p(2′OMeG)；

m7G(5′)ppp(5′)(2′OMeU)p(2′OMeG)；

m7G(5′)ppp(5′)(2′OMeA)p(2′OMeA)；

m7G(5′)ppp(5′)(2′OMeG)p(2′OMeA)；

m7G(5′)ppp(5′)(2′OMeC)p(2′OMeA)；

m7G(5′)ppp(5′)(2′OMeU)p(2′OMeA)；

m7G(5′)ppp(5′)(2′OMeA)p(2′OMeC)；

m7G(5′)ppp(5′)(2′OMeG)p(2′OMeC)；