[发明专利]一种微囊藻毒素MC-LR的批量纯化方法

权利要求书

1.一种微囊藻毒素MC-LR的批量纯化方法，从铜绿微囊藻中提取并纯化得到微囊藻毒素MC-LR，其特征在于，该纯化方法包括以下步骤：

步骤一、铜绿微囊藻的实验室培养：采用BG11培养基进行铜绿微囊藻的通气培养，所述的铜绿微囊藻为Microcystis aeruginosa FACHB-905；

步骤二、微囊藻毒素MC-LR的粗提取：将步骤一中实验室培养得到的铜绿微囊藻进行细胞破壁处理后，采用有机溶剂萃取得到微囊藻毒素MC-LR粗提液；

步骤三、微囊藻毒素MC-LR粗提液的除杂：采用MCI GEL CHP20P为填料的色谱柱进行步骤二得到的粗提液的纯化，去除粗提液中的杂质，得到初步纯化的微囊藻毒素MC-LR；

步骤四、微囊藻毒素MC-LR的制备型HPLC纯化：通过初分离和二次制备对步骤三得到的初步纯化的微囊藻毒素MC-LR进行进一步的纯化，得到色谱纯度大于95%的微囊藻毒素MC-LR；

初分离条件如下：流动相A：H₂O+0.1% TFA，流动相B：ACN+0.1% TFA；

流速：8 mL/min；检测波长：238 nm；进样量300 mL；检测器：可见紫外分光检测器；

色谱分离梯度条件：0 min，流动相A 100%，35 min，流动相A 90%，39 min，流动相A50%，43 min，流动相A 0%，47 min，流动相A 100%；

二次制备条件如下：流动相A：H₂O+0.1% TFA，流动相B：ACN+0.1% TFA；

流速：15 mL/min；检测波长：238 nm；进样量30 mL；检测器：可见紫外分光检测器；

色谱分离梯度条件：0 min，流动相A 90%，5 min，流动相A 70%，13 min，流动相A 65%，13.5 min，流动相A 65%，14 min，流动相A 10%，15 min，流动相A 10%，15.5 min，流动相A90%。

2.根据权利要求1所述的一种微囊藻毒素MC-LR的批量纯化方法，其特征在于，所述的步骤一中的BG11培养基的配方为：NaNO₃ 1.5 g/L，K₂HPO₄•3H₂O 0.04 g/L，MgSO₄•7H₂O0.075 g/L，CaCl₂.2H₂O 0.036 g/L，柠檬酸0.006 g/L，柠檬酸铁铵0.006 g/L，EDTA 0.001g/L，Na₂CO₃ 0.02 g/L，A5+Co储液1 mL，蒸馏水1000 mL；

其中A5+Co储液成分为：H₃BO₃ 2.86 g，MnCl₂•2H₂O 1.81 g，ZnSO₄•7H₂O 0.222 g，CuSO₄•5H₂O 0.079 g，NaMoO₄•2H₂O 0.390 g，Co(NO₃)₂•6H₂O 0.049 g，蒸馏水1000 mL。

3.根据权利要求1所述的一种微囊藻毒素MC-LR的批量纯化方法，其特征在于，所述的步骤二中的有机溶剂为甲醇。