[发明专利]一种高产左旋虾青素的菌种筛选方法

权利要求书

1.一种高产左旋虾青素的菌种筛选方法，其特征在于：所述筛选方法包括以下步骤：

A、出发菌株选取：选取生产情况良好，虾青素生产能力大于0.4mg/g细胞干重且发酵产物中为消旋体的红发夫酵母菌种；

B、菌种预处理：将出发菌株用生理盐水制备成菌悬液，菌株数量为10^-2/ml；

C、菌种筛选培养基制备：按照质量比2-3％葡萄糖、2-5％酵母浸粉、0.5-1％氯化钠、0.05-0.1％硫酸铵、0.02-0.08％磷酸二氢、2.5-3％琼脂粉配制基础平板培养基，并采用链霉素、硫酸亚铁、高锰酸钾、β-胡萝卜素、左旋虾青素分别配制筛选剂；

D、菌种筛选：将菌悬液按照原液、10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6不同的稀释度进行稀释，涂布在添加链霉素筛选剂的基础平板培养基上，并放置于23-25℃培养箱中培养48-52h，得到一号单菌落板；之后将一号单菌落板影印到添加硫酸亚铁筛选剂的基础平板培养基，并放置于23-25℃培养箱中培养48-52h，得到二号单菌落板；之后将所述二号单菌落板影印到基础平板培养基，并放置于23-25℃培养箱中培养48-52h，得到三号单菌落板；之后将三号单菌落板影印到添加高锰酸钾筛选剂的基础平板培养基，并放置于23-25℃培养箱中培养24-40h，得到四号单菌落板；之后将四号单菌落板影印到添加β-胡萝卜素筛选剂的基础平板培养基，并放置于23-25℃培养箱中培养48-52h，得到五号单菌落板；之后将五号单菌落板影印到添加左旋虾青素筛选剂的基础平板培养基，并放置于23-25℃培养箱中培养48-52h，得到六号单菌落板；

E、菌种培养：将所述六号单菌落板上的单菌落分别接种到微孔板种子培养基中，在23-25℃摇瓶柜中震荡培养48-56h，得到单菌落种子液；之后将所述单菌落种子液分别接种到微孔板发酵培养基中，在23-25℃摇瓶柜中震荡培养96-120h，得到单菌落发酵产物；

F、产品检测：将发酵产物进行分离、提取，得到单菌落虾青素产品，并对所述虾青素产品进行产量及旋光性进行检测，选取左旋含量高的单菌落；

G、重复试验：将步骤F中选取的所述左旋含量高的单菌落重复2-3次步骤B-F；

所述的步骤D中添加链霉素筛选剂的基础平板培养基中链霉素筛选剂的体积浓度为0.02-1mg/100mL；所述添加硫酸亚铁筛选剂的基础平板培养基中硫酸亚铁筛选剂的体积浓度为0.5-5mg/100mL；所述添加高锰酸钾筛选剂的的基础平板培养基中高锰酸钾筛选剂的体积浓度为0.5-3mg/100mL；所述添加β-胡萝卜素筛选剂的基础平板培养基中β-胡萝卜素筛选剂的体积浓度为0.8-1.5g/100mL；所述添加虾青素筛选剂的基础平板培养基中左旋虾青素筛选剂的体积浓度为3-6mg/100mL。

2.根据权利要求1所述的一种高产左旋虾青素的菌种筛选方法，其特征在于：所述的步骤E中种子培养基配方为质量比4-6％葡萄糖、2-3％酵母浸粉、0.5-1％氯化钠、0.05-0.1％硫酸铵、0.1-0.2％磷酸二氢。

3.根据权利要求2一种高产左旋虾青素的菌种筛选方法，其特征在于：所述的步骤E中发酵培养基配方为为质量比4-8％葡萄糖、3-6％酵母浸粉、0.5-1％氯化钠、0.05-0.1％硫酸铵、0.05-0.1％磷酸二氢。