[发明专利]毛竹PeDREB3基因及其在植物抗寒性调控中的应用

说明书

本发明涉及植物基因工程技术领域，具体涉及毛竹PeDREB3基因及其在植物抗寒性调控中的应用。本发明公开了毛竹PeDREB3基因及其生物学功能。毛竹PeDREB3蛋白及其编码基因的序列分别如SEQ ID NO.1和2所示。本发明首次从毛竹中克隆得到PeDREB3基因并通过在拟南芥中过表达该基因验证了其生物学功能。PeDREB3基因具有调控植物抗寒性的功能，能够为转基因毛竹的构建提供有力支持，为毛竹分子育种提供有价值的候选基因。

技术领域

本发明涉及植物基因工程技术领域，具体涉及毛竹PeDREB3基因及其在植物抗寒性调控中的应用。

背景技术

毛竹(Phyllostachys edulis)是禾本科(Gramminales)竹亚科(Bambusoideae)刚竹属(Phyllostachys)散生竹种，大多喜温暖湿润气候，在地理分布上以南方为主。虽然在20世纪50-60年代进行了大规模“南竹北移”的引种工作，使一些抗性较强的散生竹引种到黄河流域以北地区，竹子引种工作取得了较大的成功，但是，温度一直是竹类植物在中国黄河流域以北地区中较难进一步推广应用的主要限制因素。因此，进行竹种改良、培育抗寒性强的竹子新品种非常必要，这也是扩大竹子分布范围的一种重要途径。而研究寒冷条件下毛竹体内相关基因的功能则是进行新品种培育的分子基础，对于揭示竹子的抗寒分子机制，进而突破常规育种的局限性，加快竹子育种进程具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的是提供毛竹PeDREB3基因及其应用。

为了实现本发明目的，本发明提供以下技术方案：

第一方面，本发明提供毛竹PeDREB3基因，其氨基酸序列为如下(1)或(2)：

(1)如SEQ ID NO.1所示；

(2)如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等功能的由(1)衍生的氨基酸序列。毛竹PeDREB3基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明采用如下方法克隆得到PeDREB3基因：

(1)从毛竹叶片材料中提取总RNA，并将提取得到的总RNA反转录为cDNA。本发明中，毛竹总RNA的提取采用本领域常用的提取细胞总RNA的方法即可，本发明的实施例中具体采用Trizol法。

(2)在提取得到毛竹总RNA后，将所述总RNA反转录合成cDNA。在本发明中，cDNA的合成采用本领域常规的cDNA合成方法即可，无其他特殊要求；本发明的实施例中具体采用宝生物工程(大连)有限公司的AMR反转录试剂盒进行cDNA的合成。

(3)在得到cDNA之后，进行PeDREB3基因的PCR扩增，得到目的片段。

(4)PCR扩增得到目的片段后，将所述目的片段进行测序，得到PeDREB3基因；在PCR扩增后优选对目的片段进行纯化，对于纯化的方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的DNA纯化试剂盒进行即可。

(5)纯化完成后，优选将所述纯化后的目的片段连接到pGEM-TEasy载体，导入大肠杆菌DH5α感受态细胞中，经菌落PCR验证为阳性克隆后进行测序。

第二方面，本发明提供所述毛竹PeDREB3蛋白的编码基因。

优选地，所述毛竹PeDREB3蛋白的编码基因的核苷酸序列如SEQID NO.2所示。

第三方面，本发明提供含有毛竹PeDREB3蛋白的编码基因的生物材料，所述生物材料包括但不限于重组DNA、表达盒、转座子、质粒载体、病毒载体、工程菌或非可再生的植物细胞或组织。

第四方面，本发明提供毛竹PeDREB3蛋白、毛竹PeDREB3基因或含有该基因的生物材料在植物抗寒性调控中的应用。