[发明专利]一种紫点海葵多肽毒素的制备方法及其抗肿瘤应用

权利要求书

1.紫点海葵多肽毒素的应用，其特征在于，所述紫点海葵多肽毒素的制备方法包括以下步骤：

（1）海葵粗毒液的提取：活海葵经过饥饿期后，使用手动挤压法提取含有海葵粗毒的水溶液，将含有海葵粗毒的水溶液进行冷冻干燥，使用生物CE膜透析袋透析脱盐，手动挤压法的操作为将活海葵清洗干净进行手动挤压刺激海葵诱导其刺丝囊释放毒液，手动挤压方式为上下搓揉3~7次，每次2~4min；

（2）海葵粗毒分子滤过：将提取得到的海葵粗毒液，使用超滤管离心分离，选用3~30 kD超滤管，离心参数为3500~4500 r/min，时间为3~5 h，得到滤过组分；

（3）海葵毒素的纯化：将步骤（2）得到的滤过组分经微孔滤膜过滤，通过反相高效液相色谱仪梯度洗脱得到F1-F3组分，收集F1组分进行冷冻干燥，得到纯化后的紫点海葵多肽毒素；

使用反相液相色谱仪进行分离的色谱条件：检测波长为210~220 nm，反相色谱柱为C18半制备柱，洗脱液A液为体积百分比0.08~0.12% 三氟乙酸水溶液，B液为乙腈，流速为0.8~1.2 mL/min，梯度洗脱程序为：

；

所述紫点海葵多肽毒素应用于制备结肠癌细胞HCT-116的凋亡的药物中。

2.如权利要求1所述的紫点海葵多肽毒素的应用，其特征在于，步骤（1）中，活海葵饥饿期时长为24~48h。

3.如权利要求1所述的紫点海葵多肽毒素的应用，其特征在于，步骤（1）中冷冻干燥的条件为温度为-60~-100℃，压力为12~20 Pa，时间为18~30 h。

4.如权利要求1所述的紫点海葵多肽毒素的应用，其特征在于，色谱柱长250 mm，内径10 mm。

5.如权利要求1所述的紫点海葵多肽毒素的应用，其特征在于，步骤（3）中，冷冻干燥的条件为温度为-60~-100℃，压力为12~20 Pa，时间为8~16 h。