[发明专利]一种可延长猪精液常温存活期的稀释液制剂

说明书

本发明提供一种可延长猪精液常温存活期的稀释液制剂，所述稀释液制剂是将抗氧化剂加入到基础稀释液中混合制得，抗氧化剂和基础稀释液质量体积比g/L为0.03～0.15：1，每升基础稀释液含有以下质量原料：葡萄糖为15.0～50.0g、乙二胺四乙酸0.5～5.0g、茶多酚0.2～0.5g、柠檬酸钠二水合物5.0～15.0g、碳酸氢钠0.05～5.0g、氯化钾0.02～3.0g，所述抗氧化剂由质量比为0.3～0.8:2～5:1.3～2:1的芹菜素、咖啡酸苯乙酯、香豆酸和白花丹提取物制得，本发明优化稀释液制剂的基本原料和用量比例，提高在常温条件下延长猪精液存活期，并且维持与受精能力相关的精子指标，为获得高品质、高产量、低成本的常温储存猪精液具有一定指导意义。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种可延长猪精液常温存活期的稀释液制剂。

背景技术

随着人工授精辅助技术在生猪产业中的推广应用，猪精液品质的优劣是决定人工配种成败与否的关键因素之一。目前，猪精液的保存方式主要有常温保存与冷冻保存，由于猪精子头部质膜不饱和脂肪酸的含量较高，冷冻保存过程中抵抗氧化损伤的能力较弱，使解冻后精子的品质(如活率、质膜功能完整性与顶体功能完整性)大大降低继而影响生产业绩。因此，猪精液的常温保存仍为我国现如今集约化与规模化养殖场所采用的主要精液保存方式。

在如今的集约化养殖场中，猪精液常温保存的一般天数为2-3天，随着保存时间的递增，精子的品质逐渐下降，大部分的精液被弃之不用，其中最为主要的因素是由于活性氧(ROS)的存在。新鲜采集的精液中由于精浆的存在可使活性氧的含量得以维持平衡。但随着精液稀释后保存时间的增长，大量活性氧的产生导致这一机制的失衡。高比例的多不饱和脂肪酸可被精子膜中过多的活性氧氧化继而改变精子质膜的完整性。因此，补充外源性抗氧化剂可减少氧化应激对精子品质的影响。然而，目前市场上所添加的抗氧化剂一般为人工合成，如丁基羟基茴香醚，存在着一定的毒害作用；或者直接添加酶类抗氧化剂，例如过氧化氢酶，但其价格较昂贵，并且添加到稀释剂中的有效保存时间一般为1-5天，精子的有效活率只维持在40％-50％左右，降低了种用资源的有效利用率。

咖啡酸苯乙酯(CAPE)是从蜂胶中提取的主要成份。咖啡酸苯乙酯具有抗氧化，抗炎和抗微生物等生物功能。研究表明，咖啡酸苯乙酯可抑制黄嘌呤氧化酶和一氧化氮合酶(NOS)活性的性质，减少对超氧化物歧化酶SOD的消耗。还可在一定程度上可增强过氧化氢酶CAT的活性，减轻过氧化氢含量对精子的影响，从而起到抗氧化作用。

专利“一种提高解冻后猪精子体外受精效果的方法”，申请号：202010745845.9，公开了单独将咖啡酸苯乙酯加入到基础液中能提升解冻后精液的活性，但未公开精液的存活率和存活时间欠佳。

芹菜素(apigenin)，又称芹黄素、洋芹素。是一种黄酮类化合物。在自然界广泛分布。主要存在于瑞香科、马鞭草科、卷柏科植物中，广泛分布于温热带的蔬菜和水果中，尤以芹菜中含量为高，芹菜素具有抑制致癌物质的致癌活性；作为治疗HIV和其它病毒感染的抗病毒药物；MAP激酶的抑制剂；治疗各种炎症；抗氧化剂；镇静、安神；降压。与其他黄酮类物质(槲皮素、山奈黄酮)相比具有低毒、无诱变性等特性。

香豆酸(coumalic acid)化学名称为2-吡喃酮-5-羧酸，主要分布在禾本科植物的茎干中，属于内酯类化合物。现代药理学研究表明，内酯类化合物具有广泛的药理作用，在抗血小板活化、抗肿瘤、免疫抑制等方面显示出明显的药理作用；由于可形成共振稳定的酚自由基，对香豆酸具有良好的抗氧化活性。它对过氧化氢、超氧自由基、轻自由基、过氧化亚硝基有强烈的清除作用，对单线态氧有淬灭作用。在淬灭自由基的同时，对香豆酸还能抑制产生自由基的酶，促进产生清除自由基的酶。