[发明专利]一种锰离子-CpG寡核苷酸纳米颗粒的制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种锰离子‑CpG寡核苷酸纳米颗粒的制备方法,包括以下步骤：用去离子水溶解无水氯化锰得到氯化锰溶液待用；用去离子水将CpG寡脱氧核苷酸CpG ODN溶解得到CpG ODN溶液待用；将所配制的氯化锰溶液与所配制的CpG ODN溶液混合于无菌生理盐水中，振荡混匀，即得到锰离子‑CpG寡核苷酸纳米颗粒。相比于单独使用氯化锰或CpG ODN，本发明方法制备得到的锰离子‑CpG寡核苷酸纳米颗粒能够显著的促进肿瘤细胞坏死，抑制肿瘤细胞的生长，同时能够使脾脏中NKT细胞的数量增加，使脾脏中CD4⁺T、CD8⁺T细胞的增殖能力显著增强，显示出了良好的抗肿瘤作用。并且，该纳米颗粒的原料成本较低，且制备工艺简单，生物安全性较高。在肿瘤免疫治疗中有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及一种锰离子-CpG寡核苷酸纳米颗粒的制备方法及应用。

背景技术

锰元素是机体所必需的微量元素之一。最新的研究发现,锰离子可以通过传递病毒入侵的信号来激活固有免疫系统中的各个环节,协助机体抵抗病毒的入侵。在机体固有免疫应答中起到“传令兵”的作用。研究表面,小鼠缺乏锰离子后对于肿瘤的抵抗能力明显减弱,证明锰元素在对肿瘤的免疫监视中具有重要的作用。

CpG ODN(CpG oligonucleotide,CpG寡脱氧核苷酸)是人工合成的含有非甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸(CpG)的寡脱氧核苷酸(ODN)，可激活多种免疫细胞，促进肿瘤抗原呈递，诱导Th1免疫反应，促进抗原特异性抗体的产生和CD8⁺T细胞的细胞毒性。在肿瘤微环境中，CpG ODN可激活免疫系统，打破免疫抑制状态，从而抑制肿瘤生长。CpG ODN作为单药已在黑色素瘤、胶质母细胞瘤、肾细胞癌、T细胞淋巴瘤等患者中进行了评估，并证明了其抗肿瘤活性。作为单独的治疗药物，CpG ODN临床试验全身给药的效果较差，所以目前多为瘤内注射，一定程度上限制了其在实体瘤上的应用。同时对于已建立的肿瘤来说，CpG ODN诱导的免疫反应通常不足以完全清除肿瘤，因此，CpG ODN与其他疗法联合的治疗方案仍在探索中，特别是联合那些可能削弱肿瘤使其更易受到免疫介导性攻击的疗法。

近年来，纳米材料在生命科学领域的研究及应用备受关注。纳米颗粒进入人体和细胞之后，可直接诱导产生多种生物学效应，例如激活机体免疫应答反应、促进细胞凋亡等。由于肿瘤微环境的复杂性，大多数功能性试剂(如小分子化疗药物)递送到肿瘤细胞内的浓度有限，治疗效果也不佳，甚至产生不良副作用和毒性问题。与正常组织血管相比，纳米颗粒在肿瘤血管具有更强的渗透性，会蓄积在肿瘤部位。针对肿瘤微环境特性，构建纳米平台用于癌症诊断和肿瘤治疗被认为是改善癌症治疗的有效方法。基于纳米颗粒的药物载体作为癌症诊断和治疗工具，已被证明可增强抗肿瘤效率并降低副作用。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明旨在提供一种锰离子-CpG寡核苷酸纳米颗粒的制备方法及应用。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种锰离子-CpG寡核苷酸纳米颗粒的制备方法,包括以下步骤：

S1、用去离子水溶解无水氯化锰得到氯化锰溶液待用；

S2、用去离子水将CpG寡脱氧核苷酸CpG ODN溶解得到CpG ODN溶液待用；

S3、将步骤S1所配制的氯化锰溶液与步骤S2所配制的CpG ODN溶液混合于无菌生理盐水中，振荡混匀，即得到锰离子-CpG寡核苷酸纳米颗粒。

进一步地，步骤S1中，所述氯化锰溶液的浓度为100mg/ml。

进一步地，步骤S2中，所述CpG ODN溶液的浓度为2.5mg/ml。

进一步地，步骤S3中，所述无菌生理盐水：氯化锰溶液：CpG ODN溶液的体积比例为5：1：4。