[发明专利]一种中华鲟F2

权利要求书

1.一种中华鲟F₂精子超低温冷冻保存方法，其特征在于，包括以下具体步骤：

1)亲鱼催产：B超检查性腺，挑选性腺发育至Ⅳ期、健壮无疾病的中华鲟F2雄鱼，称重、根据重量注射促黄体素释放激素后放入暂养池培育；

2)鲜精采集：14-20h后采集精液在4℃冷藏避光保存；

3)鲜精活力检测：测定精子质量，在显微镜下进行观察，选择鲜精平均活力达80％、快速运动达10秒、寿命达80秒的精子进行冻存；

4)冻存液配制：冻存液包括精子稀释液和抗冻剂，中华鲟F2精子稀释液用超纯水配制，配方：蔗糖23.4mmol/L，Tris 30mmol/L，KCl 0.25mmol/L，调节pH值到8.0，置于4℃冰箱冷藏备用；采用甲醇作为抗冻剂，并提前置于4℃冰箱预冷；将4℃预冷的稀释液与甲醇按照4:1的体积比配制冻存液；

5)精液稀释：取4℃预冷的冻存液到玻璃烧杯中，取等体积预冷的鲜精混匀，混匀后立即分装到1.8mL的冻存管，每管分装1-1.5mL；

6)冷藏平衡：分装完成后，将冻存管装到布袋中，于4-6℃冰箱中平衡15min；

7)降温入液氮：平衡完毕，取出布袋，在液氮表面上方10cm处平衡10min后，投入-196℃的液氮中长期保存。

2.根据权利要求1所示的中华鲟F₂精子超低温冷冻保存方法，其特征在于，步骤1)中，所述的促黄体素释放激素为：注射用促黄体素释放激素A2。

3.根据权利要求2所示的中华鲟F₂精子超低温冷冻保存方法，其特征在于，所述的促黄体素释放激素用量为1μg/kg。

4.根据权利要求1所示的中华鲟F₂精子超低温冷冻保存方法，其特征在于，步骤2)中，采集精液的具体操作为：用有刻度带盖的500mL广口塑料瓶采用腹部挤压法采集精液，采精时避免吸到尿液、粪便及血液。

5.根据权利要求1所示的中华鲟F₂精子超低温冷冻保存方法，其特征在于，步骤3)中，具体操作为：在10×10倍生物显微镜下进行观察，选择鲜精平均活力达80％、快速运动达10秒、寿命达80秒的精子进行冻存。

6.根据权利要求1所示的中华鲟F₂精子超低温冷冻保存方法，其特征在于，同一尾中华鲟F2采集的精子可重复步骤4)-7)进行冻存。