[发明专利]一种蛋白检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种蛋白检测试剂盒，其特征在于，包括第一抗体-寡核苷酸探针、第二抗体-寡核苷酸探针、上游引物和下游引物，所述第一抗体-寡核苷酸探针和第二抗体-寡核苷酸探针具有靶向不同抗原表位的结合点以及可形成互补链的寡核苷酸，并被配置成可在用戊二醛处理的预包被抗体的固相界面上同时识别并结合待测靶蛋白，以及在DNA聚合酶的作用下发生邻位延伸反应，所述上游引物和下游引物被配置成扩增所述邻位延伸反应形成的基因片段。

2.如权利要求1所述的蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述固相界面为PCR管，所述PCR管的材质为聚丙烯。

3.如权利要求1所述的蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述第一抗体-寡核苷酸探针由抗体、磺基-SMCC、5'-硫醇修饰合成的第一寡核苷酸交联而成，所述第二抗体-寡核苷酸探针由抗体、磺基-SMCC、5'-硫醇修饰合成的第二寡核苷酸交联而成。

4.如权利要求3所述的蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述抗体为C反应蛋白多克隆抗体，所述第一寡核苷酸和第二寡核苷酸的序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所述。

5.如权利要求3所述的蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述抗体为心肌肌钙蛋白单克隆抗体，所述第一寡核苷酸和第二寡核苷酸的序列分别如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所述。

6.如权利要求4所述的蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述上游引物和下游引物的序列分别如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所述。

7.如权利要求5所述的蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述上游引物和下游引物的序列分别如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所述。

8.如权利要求1所述的蛋白检测试剂盒，其特征在于，还包括洗涤缓冲液，所述洗涤缓冲液包括1×磷酸缓冲液、牛血清白蛋白和吐温20，所述洗涤缓冲液被配置成可对所述预包被抗体的固相界面进行洗涤。

9.一种蛋白检测试剂盒的检测方法，其特征在于，使用如权利要求1-8中任一项所述的蛋白检测试剂盒在用戊二醛处理的预包被抗体的固相界面上识别并结合待测靶蛋白，进行固相邻位延伸反应，通过荧光定量PCR扩增反应对待测靶蛋白的特异性进行定量或半定量检测。

10.如权利要求9所述的蛋白检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述PCR扩增反应包括：酶激活，50℃保持2min；预变性，95℃保持2min；循环40次，每次变性95℃保持15s，退火55-60℃保持15s，延伸72℃保持30-40s。