[发明专利]一种HPLC同时检测NMN中多种有关物质的方法

说明书

本发明公开了一种HPLC同时检测NMN中多种有关物质的方法，属于食品技术领域，采用高效液相色谱法同时检测NMN中5个杂质，色谱柱采用C18‑Aq柱，流动相A为磷酸二氢钾缓冲盐溶液，流动相B为甲醇，洗脱方式为梯度洗脱，流速为1.0ml/min，柱温为20℃，可以定量检测NMN中ATP、ADP、AMP、烟酰胺、NH03的含量，本发明方法操作简便，专属性强，准确度高，适用性广，可以更好的控制NMN的品质，为食品安全提供保障。

技术领域

本发明属于食品技术领域，特别涉及一种HPLC同时检测NMN中多种有关物质的方法。

背景技术

β-烟酰胺单核苷酸(NMN)是生物体内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸补救合成途径的前体物，在延缓衰老、治疗帕金森等老年病、糖尿病、阿尔茨海默症、心脑血管疾病、调控mRNA的表达等方面具有良好的医疗保健效果。NMN已逐渐应用于保健食品和医学药物。近年研究发现，人为补充NMN可以修复脑损伤、改善胰岛功能、改善睡眠、保护心脏免于缺血再灌注损伤、修复脑线粒体呼吸缺陷，对老年退行性疾病、视网膜退行性疾病等均具有一定治疗作用。目前，化学合成法制备NMN的技术较为成熟，但目前用于NMN的检测手段较少，存在食品安全等问题。NMN的制备过程中，需要随时监测中间体和成品的含量，以提高产品质量，因此，开发一种同时检测NMN中多种有关物质的HPLC方法是十分重要的。

发明内容

为了解决上述背景技术中的技术问题，本发明采用以下技术方案，一种HPLC同时检测NMN中多种有关物质的方法，包括以下步骤：

1）仪器的选择：高效液相色谱仪；色谱柱为AQ-C18，4.6mm×250mm，5µm或效能相当的色谱柱；流动相：流动相A：磷酸二氢钾缓冲盐溶液，流动相A为50mM磷酸二氢钾缓冲盐溶液，调节PH至4.5；流动相B：甲醇；采用紫外检测器，检测波长为200~300nm；流动相流速为0.5~1.5ml/min；柱温为15~35℃；色谱柱柱长为100~250mm；

2）配制溶液，配制下列溶液：

a、稀释剂：纯化水；

b、烟酰胺、ATP、ADP杂质对照品储备溶液：通过将烟酰胺对照品、ATP对照品、ADP对照品精密称定后置于量瓶中加稀释剂溶解并稀释摇匀；

c、AMP对照品储备溶液：通过将AMP对照品精密称定后置于量瓶中加稀释剂并超声溶解并稀释摇匀；

d、NH03对照品储备溶液：将NH03对照品精密称定后置于量瓶中加稀释剂并在30℃-50℃水浴超声溶解并稀释摇匀；

e、对照品溶液：分别精密移取烟酰胺、ATP、ADP杂质对照品储备溶液、AMP对照品储备溶液和NH03对照品储备溶液于量瓶中并加稀释剂溶解摇匀；

f、供试品溶液：取NMN供试品精密称定后置于量瓶中加稀释剂溶解并稀释摇匀；

g、加标供试品溶液：取NMN供试品精密称定置后置于量瓶中，分别精密移取烟酰胺、ATP、ADP杂质对照品储备溶液、AMP对照品储备溶液、NH03对照品储备溶液至此量瓶中，然后加稀释剂溶解并稀释摇匀；

3）测量记录：精密量取空白溶液，加标供试品溶液、对照品溶液、供试品溶液分别注入液相色谱仪，记录液相色谱图，按外标法以峰面积计算。本发明中所述的有关物质包括ATP、ADP、AMP、烟酰胺和NH03。本发明的进样量：20μL；样品盘控温：5℃；运行时间：35min，按图3梯度进行洗脱。

其中具体配比溶液方法如下：

a、稀释剂：纯化水；

b、烟酰胺、ATP、ADP杂质对照品储备溶液：取烟酰胺对照品、ATP对照品、ADP对照品各约16mg，精密称定，置100ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；