[发明专利]一种宫颈癌免疫组化分析试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种宫颈癌免疫组化分析试剂盒，其特征在于，包括金属-一抗复合纳米粒子Ⅰ、金属-二抗复合纳米粒子Ⅱ、抗原修复液、清洗液，所述二抗中含有拉曼活性物质标记。

2.根据权利要求1所述的宫颈癌免疫组化分析试剂盒，其特征在于，所述金属为可以与抗体发生配位反应的金属粒子，所述金属粒子的粒径为10～1000nm；

优选地，所述金属粒子选自钛纳米粒子、铜纳米粒子、镍纳米粒子、银纳米粒子、镉纳米粒子、铝纳米粒子、铂纳米粒子和钴纳米粒子中的一种；

优选地，所述金属粒子为银纳米粒子或铜纳米粒子。

3.根据权利要求1所述的宫颈癌免疫组化分析试剂盒，其特征在于，所述一抗为单克隆抗体，所述一抗选自单克隆抗体CD3、单克隆抗体p53、单克隆抗体ki-67、单克隆抗体CK7、单克隆抗体CK20、单克隆抗体TTF-1、单克隆抗体p16中的两种或两种以上；

优选地，所述金属-一抗复合纳米粒子Ⅰ包括金属-单克隆抗体p16复合纳米粒子和金属-单克隆抗体ki-67复合纳米粒子两种溶液。

4.根据权利要求1所述的宫颈癌免疫组化分析试剂盒，其特征在于，所述一抗为多克隆抗体，所述多克隆抗体选自多克隆抗体CD3、多克隆抗体p53、多克隆抗体ki-67、多克隆抗体CK7、多克隆抗体CK20、多克隆抗体TTF-1、多克隆抗体p16中的两种或两种以上；

优选地，所述金属-一抗复合纳米粒子Ⅰ包括金属-多克隆抗体p16复合纳米粒子和金属-多克隆抗体ki-67复合纳米粒子两种溶液。

5.根据权利要求1所述的宫颈癌免疫组化分析试剂盒，其特征在于，所述抗原修复液为pH为6.0的柠檬酸缓冲液或pH为8.0的EDTA缓冲液。

6.根据权利要求1所述的宫颈癌免疫组化分析试剂盒，其特征在于，所述清洗液为PBST清洗液。

7.根据权利要求1所述的宫颈癌免疫组化分析试剂盒，其特征在于，所述拉曼活性物质选自赖氨酸、二甲基甲酰胺、偶氮二甲酰胺、四溴酚蓝、端氨基聚氨酯、2,6-二叔丁基对甲基苯酚、对氨基苯甲酸、偶氮甲碱、氨基吖啶中的一种。

8.一种宫颈癌免疫组化分析试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将单克隆抗体或多克隆抗体加入金属纳米粒子溶液中混匀，孵育，得到金属-一抗复合纳米粒子Ⅰ；

将含有拉曼活性物质标记的二抗加入金属纳米粒子溶液中，得到金属-二抗复合纳米粒子Ⅱ；

配制抗原修复液和清洗液。

9.根据权利要求8所述的宫颈癌免疫组化分析试剂盒的制备方法，其特征在于，所述金属纳米粒子溶液的制备包括以下步骤：将金属纳米粒子溶液或金属氧化物纳米粒子溶液或金属化合物粒子溶液加入到PBS缓冲液中，震荡使金属纳米粒子均匀分散即得。

10.宫颈癌免疫组化分析试剂盒在检测细胞异常增殖中的应用，其特征在于，包括以下步骤：抗原修复、过氧化物酶阻断剂阻断、滴加金属-一抗复合纳米粒子溶液孵育、滴加金属-二抗复合纳米粒子溶液孵育、衬染、脱水、封片和拉曼光谱仪扫描。