[发明专利]用于治疗脊髓性肌萎缩的腺相关病毒载体及其用途

权利要求书

1.一种重组核酸分子，其包含可操作的依次连接的启动子、杂合内含子和编码功能性运动神经元存活蛋白的核酸序列。

2.权利要求1所述的重组核酸分子，其中，所述启动子是CAG启动子，其包含巨细胞病毒早期增强子元件和鸡β-肌动蛋白启动子；所述杂合内含子序列如SEQ ID NO:3所示。

3.权利要求2所述的重组核酸分子，其中，所述巨细胞病毒早期增强子元件具有选自以下的多核苷酸序列：

1)SEQ ID NO:1所示多核苷酸序列；

2)SEQ ID NO:1所示多核苷酸序列经过取代、缺失或添加一个或多个核苷酸而得到的核苷酸序列；或

3)与SEQ ID NO:1具有80％以上序列同一性的多核苷酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的序列；更优选地，具有98％或99％以上同一性的序列；

优选地，所述鸡β-肌动蛋白启动子具有选自以下的多核苷酸序列：

1)SEQ ID NO:2所示多核苷酸序列；

2)SEQ ID NO:2所示多核苷酸序列经过取代、缺失或添加一个或多个核苷酸而得到的核苷酸序列；或

3)与SEQ ID NO:2具有80％以上序列同一性的多核苷酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的序列；更优选地，具有98％或99％以上同一性的序列。

4.权利要求1-3中任一所述的重组核酸分子，其中，所述编码功能性运动神经元存活蛋白的核酸序列具有选自以下的多核苷酸序列：

1)SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:8所示多核苷酸序列；

2)SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:8所示多核苷酸序列经过取代、缺失或添加一个或多个核苷酸而得到的核苷酸序列；或

3)与SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:8具有80％以上序列同一性的多核苷酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的序列；更优选地，具有98％或99％以上同一性的序列；

更优选地，所述多核苷酸序列是密码子优化的序列。

5.权利要求1-4中任一所述的重组核酸分子，其中，所述重组核酸分子还包含多聚腺苷酸、Kozak序列、WPRE和转录后调节元件中的一种或多种；其中，所述多聚腺苷酸具有选自以下的多核苷酸序列：

1)SEQ ID NO:7所示多核苷酸序列；

2)SEQ ID NO:7所示多核苷酸序列经过取代、缺失或添加一个或多个核苷酸而得到的核苷酸序列；或

3)与SEQ ID NO:7具有80％以上序列同一性的多核苷酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的序列；更优选地，具有98％或99％以上同一性的序列。

6.权利要求1-5中任一所述的重组核酸分子，其中，所述重组核酸分子包含SEQ ID NO:4所示的多核苷酸序列；优选地，所述重组核酸分子具有选自以下的多核苷酸序列：

1)SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10所示多核苷酸序列；

2)SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10所示多核苷酸序列经过取代、缺失或添加一个或多个核苷酸而得到的核苷酸序列；或

3)与SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10具有80％以上序列同一性的多核苷酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的序列；更优选地，具有98％或99％以上同一性的序列。

7.权利要求1-6中任一所述的重组核酸分子，其中，所述重组核酸分子还包含AAV反向末端重复序列；优选地，所述AAV反向末端重复序列选自不同血清型的AAV；优选地，所述AAV反向末端重复序列选自进化支A-F中的任意血清型的AAV或AAV1型、AAV2型、AAV3型、AAV4型、AAV5型、AAV6型、AAV7型、AAV8型、AAV9型或其杂交/嵌合型中的任意一个；更优选地，所述AAV反向末端重复序列来自AAV2型。