[发明专利]类器官组织冰冻切片包埋试剂盒及包埋方法

说明书

本发明涉及一种类器官组织冰冻切片包埋试剂盒及包埋方法，其能提高类器官结构的完整性，降低蛋白抗原丢失，防止基因(RNA、DNA)的降解，能极大地提高类器官组织冰冻切片的制备成功率。

技术领域

本发明涉及类器官技术领域，特别涉及一种用于类器官的冰冻包埋试剂盒及包埋方法。

背景技术

类器官属于三维(3D)细胞培养物，包含其代表器官的一些关键特性，是Clever等人在《Sato T,Vries RG,Snippert HJ,et al.Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche》Nature.2009May14；459(7244):262-5文章里，对于小肠干细胞分离培养中，发现单个单细胞可以形成肠道的隐窝绒毛结构而提出的。近年来，类器官技术发展迅猛，先后建立了脑、肺、肝脏、肾脏、肠道、胃等多种类器官，应用于精准医疗、器官移植、药物筛选、药物作用机制研究等多个领域。类器官的优势在于，能够模拟多种细胞之间的信号交流以及体内细胞的运动，可以在培养过程中维持基因稳定性，还能模拟人体发育和疾病的发展过程，弥补动物实验的缺陷，并且可实现实时成像。

细胞在体外生长依赖于细胞黏附和细胞骨架，由于类器官是三维结构，因此需要相应环境的支持，促使类器官形成三维特性最常见方法是使用支持细胞生长和细胞可以黏附的固体细胞外基质。目前，常用的细胞外基质主要有天然细胞外基质、基质胶(又称有机体衍生基质Matrigel)、细胞外基质-化学水凝这三类，其中基质胶是使用最为广泛的一种。

基质胶具有在不同温度中呈现不同相态的特性，当处于-20℃以下时为固态，4-8℃时为液态，37℃以上固化为果冻状，而类器官在基质胶中的培养环境是37℃的二氧化碳培养箱，因此固定在基质胶中的类器官为果冻状，这样特殊的相态导致直接在类器官基质胶中制备冰冻切片非常困难，其主要存几个问题如下：

第一，类器官的包埋固定试剂种类较多，各种包埋固定试剂的使用条件不同，无法保证抗原不丢失、基因不降解。

第二，基质胶着色问题，由于基质胶本身没有颜色，因此用包埋固定试剂固定后无法确定类器官的所在位置，只能盲切，很难获取很好的样本位置，浪费实验耗材，甚至是会导致实验失败。

第三，类器官培养孔板的样式众多，从6孔板到96孔，均可培养类器官，不同孔板的培养孔大小不一，而基质胶又是果冻状的，因此很难完整取出培养类器官的基质胶，从而容易导致类器官的结构破坏。

第四，由于类器官基本上都是在细胞培养板中进行培养，细胞培养板不能直接包埋，并且不同的培养板，培养的类器官体积数量也有差异，没有很好的包埋模具。

因此在类器官的冰冻切片样本制备中，类器官组织的固定，类器官组织的取材，类器官组织包埋模具，都是导致类器官组织冰冻切片预制备是否成功的关键因素，也是迫切需要解决的问题。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种类器官组织冰冻切片包埋试剂盒及包埋方法，其能提高类器官结构的完整性，降低蛋白抗原丢失，防止基因(RNA、DNA)的降解，能极大地提高类器官组织冰冻切片的制备成功率。

本发明的一种技术方案是：一种类器官组织冰冻切片包埋试剂盒，包括外盒，所述外盒内设有一包埋盒、一取胶器，以及一组包埋试剂，所述包埋盒包括筒体、底板，所述筒体的内径为10～15mm，筒体深15～20mm，筒体的壁厚1～2mm，所述底板上端设置一供筒体插入的环形定位槽，所述环形定位槽的槽宽与筒体的壁厚吻合，所述底板中间设有轴向通孔，底板的下表面粘接固定一锡箔纸，通过锡箔纸密封轴向通孔的下端，所述筒体上端设有筒盖；