[发明专利]一种提高多能干细胞定向诱导心肌细胞产量及纯度的方法

权利要求书

1.一种培养基，其特征在于，包含以下任意一种：

1)EB形成培养基；优选地，所述EB形成培养基是在IPS基础培养基中加入有机化合物PVA和/或MC；

优选地，所述IPS基础培养基是TeSR-E8；

优选地，所述有机化合物PVA的浓度为1-8mg/ml；最优选地，所述PVA浓度为4mg/ml；

优选地，所述有机化合物MC浓度为0.1％-1％；最优选地，所述MC浓度为0.3％-0.5％；

2)心脏祖细胞诱导分化培养基；优选地，所述心脏祖细胞诱导分化培养基是向心脏祖细胞诱导分化基础培养基中添加细胞因子和/或GSK-3抑制剂配制而成的；

优选地，所述细胞因子是BMP4；优选地，所述BMP4的浓度为25ng/ml；

优选地，所述GSK-3抑制剂是CHIR99021；优选地，所述CHIR99021浓度是3μM-5μM；

优选地，所述心脏祖细胞诱导分化基础培养基中的主要成分是第一细胞培养基和/或谷氨酰胺；

优选地，所述第一细胞培养基是DMEM/F-12培养基；

优选地，所述谷氨酰胺是其代替物；优选地，所述代替物选用GlutaMAX^TMSupplement；

优选地，所述心脏祖细胞诱导分化基础培养基中还包括硫代甘油，L-抗坏血酸，过氧化氢酶，还原型谷胱甘肽，人类胰岛素，超氧化物歧化酶，转铁蛋白，T3，L-肉碱，乙醇胺，半乳糖，腐胺，亚硒酸钠，皮质酮，亚油酸，亚麻酸，孕酮，DL-α生育酚，DL-α-生育酚乙酸酯，油酸，哌酸和生物素；

3)心肌细胞诱导分化培养基；优选地，所述心肌细胞诱导分化培养基是在心肌细胞诱导分化基础培养基中加入细胞因子、wnt通路抑制剂和添加剂中的一种或多种；

优选地，所述细胞因子是BMP4；优选地，所述BMP4的浓度为10ng/ml；

优选地，所述Wnt通路抑制剂包括C59和/或IWR-1；更优选地，所述Wnt通路抑制剂是C59和/或IWR-1；

优选地，所述C59的浓度是0.1-10μM；优选地，所述C59的浓度是2μM；

优选地，所述IWR-1的浓度是0.1-10μM；优选地，所述IWR-1的浓度是5μM；

优选地，所述添加剂是视黄醇，过氧化氢酶，还原型谷胱甘肽，超氧化物歧化酶，转铁蛋白，T3，L-肉碱，乙醇胺，半乳糖，腐胺，亚硒酸钠，皮质酮，亚油酸，亚麻酸，孕酮，DL-α生育酚，DL-α-生育酚乙酸酯，油酸，哌酸和生物素；

优选地，所述心肌细胞诱导分化基础培养基的主要成分是第二细胞培养基和/或谷氨酰胺；

优选地，所述心肌细胞诱导分化基础培养基还包括Penicilin和streptomycin；

优选地，所述第二细胞培养是RPMI-1640；

优选地，所述谷氨酰胺是其代替物；优选地，所述代替物选用GlutaMAX^TMSupplement；

4)心肌细胞成熟培养基；优选地，所述心肌细胞成熟培养基与心肌细胞诱导分化基础培养基成分一致；

优选地，所述心肌细胞成熟培养基还包括以下成分：视黄醇，过氧化氢酶，还原型谷胱甘肽，超氧化物歧化酶，转铁蛋白，T3，L-肉碱，乙醇胺，半乳糖，腐胺，亚硒酸钠，皮质酮，亚油酸，亚麻酸，孕酮，DL-α生育酚，DL-α-生育酚乙酸酯，油酸，哌酸，生物素以及人胰岛素；

5)心肌纯化培养基；所述心肌纯化培养基是向第三细胞培养基中添加L-乳酸和/或硫酸庆大霉素；

优选地，所述第三细胞培养基是DMEM培养基；

优选地，所述DMEM培养基是含低于1000mg/L葡萄糖的培养基或不含葡萄糖的培养基；

优选地，所述L-乳酸的体积百分数为1％-5％；优选地，所述体积百分数为1％；

优选地，所述硫酸庆大霉素在该培养基中的浓度为15-35μg/ml；优选地，所述硫酸庆大霉素在该培养基中的浓度为25μg/ml。