[发明专利]一种检测妥布霉素的生物传感器及检测方法

权利要求书

1.一种检测妥布霉素的生物传感器，其特征在于，包括适配体探针、发夹探针H1、发夹探针H2、Klenow Fragment聚合酶、Nt. BbvCI核酸内切酶、缓冲液和氧化石墨烯；

所述适配体探针的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示，适配体探针为适配体Aptamer和扩增模板T杂交而成，所述适配体Aptamer的核苷酸序列如SEQ ID No：2所示，所述扩增模板T的核苷酸序列如SEQ ID No：3所示；

所述发夹探针H1的核苷酸序列如SEQ ID No：4所示；

所述发夹探针H2的核苷酸序列如SEQ ID No：5所示。

2.权利要求1所述生物传感器检测妥布霉素的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）将适配体Aptamer和扩增模板T杂交为适配体探针，加入水和缓冲液，95℃金属浴中孵育3-5min，然后冷却，得到适配体发夹结构产物；

（2）将发夹探针H1、发夹探针H2、水和缓冲液混合后在95℃金属浴中孵育3-5min，冷却后得到发夹结构产物；

（3）将适配体发夹结构产物、妥布霉素检测物、10 x smart cut buffer ，dNTP， Nt.BbvCI核酸内切酶和Klenow Fragment聚合酶混合均匀后金属浴中孵育，然后加入步骤（2）制得的发夹结构产物，混合均匀，得到链置换反应溶液；

（4）往链置换反应溶液中加入氧化石墨烯溶液，金属浴中孵育后，利用荧光分光光度计测量荧光信号。

3.如权利要求2所述生物传感器检测妥布霉素的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述适配体探针用量为1 uL、100 μM，水的用量为61.5 uL ，缓冲液为2 x T-100 Na，用量为62.5uL，所述缓冲液 2 x T-100 Na配方：25mM Tris, 100mM NaCl, pH 7.3。

4.如权利要求2所述生物传感器检测妥布霉素的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述发夹探针H1和H2的摩尔比为1:1，发夹探针H1和H2的总用量为1 uL、100 μM，水的用量为79 uL，缓冲液为5 x T-500 Na，用量为20 uL，所述缓冲液5 x T-500 Na配方：25 mM Tris, 500mM NaCl, pH 7.3。

5.如权利要求2所述生物传感器检测妥布霉素的方法，其特征在于，步骤（3）中，适配体发夹结构产物用量为1.5 uL、800 nM，妥布霉素检测物为3 uL，10 x smart cut buffer用量为3 uL，dNTP为1 uL 、10 mM， Nt. BbvCI核酸内切酶为2 U，Klenow Fragment聚合酶为0.5 U；所述10 x smart cut buffer配方为：50 mM 乙酸钾，20 mM 三羟基氨甲烷醋酸盐，10 mM 醋酸镁，100 μg/mL 牛血清蛋白，pH 7.9。

6.如权利要求2所述生物传感器检测妥布霉素的方法，其特征在于，步骤（3）中，孵育温度为37 ℃，时间为1-2 h。

7.如权利要求2所述生物传感器检测妥布霉素的方法，其特征在于，步骤（4）中，加入氧化石墨烯溶液后，氧化石墨烯在链置换反应溶液中的终浓度为25 μg / mL。

8.如权利要求2所述生物传感器检测妥布霉素的方法，其特征在于，步骤（4）中，孵育温度为37 ℃，时间为1-2 h。

9.如权利要求2至8任一项所述生物传感器检测妥布霉素的方法，其特征在于，步骤（4）中，设置荧光分光光度计激发波长为480 nm，扫描范围为500 - 650 nm。