[发明专利]一种强化高产优质耐生物和非生物胁迫多基因聚合及遗传背景稳定性的水稻育种方法

权利要求书

1.一种强化高产优质耐生物和非生物胁迫多基因聚合及遗传背景稳定性的水稻育种方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）以籼型恢复系桂451作母本，蜀恢527作为父本进行杂交，获得F₁代种子；种植F₁代，成熟后全部单株混收获得F₂代种子；

（2）在稻瘟病自然诱发鉴定圃种植F₂代遗传分离大群体，分单株提取DNA，利用分子标记引物分别对直链淀粉含量基因Wx进行检测，以恢复系蜀恢527为对照，筛选基因型纯合WxWx的单株，根据穗瘟抗性鉴定结果，从这些单株中选择穗瘟达到抗和高抗，且主要农艺性状优良的单株作为目标单株，分单株收获种子形成F₃株系；

（3）分株系种植F₃代种子，利用对应的分子标记引物分别对稻瘟病抗性基因Pi5、Pita、Pid2、Pid3进行检测，选择目标基因型为三纯一杂以及双纯双杂，且主要农艺性状优良的单株做为目标单株，以上单株均分单株收获种子，形成F₄株系；

（4）按株系播种进行自然耐冷性鉴定，选择无烂秧、叶片绿色无白化的耐冷株系分单株种植，对照选育系谱，继续对目标基因型为三纯一杂及双纯双杂的株系进行分子标记检测，选择四个目标稻瘟病基因型均纯合Pi5Pi5PitaPitaPid2Pid2Pid3Pid3,且主要农艺性状优良的单株，以上单株均分单株收获种子，形成F₅株系；

（5）分株系种植F₅代种子，利用分子标记引物对褐飞虱抗性基因bph2进行检测，以恢复系桂451为对照，筛选基因型纯合bph2 bph2且选择农艺性状优良的单株，分单株收获种子，形成F₆株系；至此世代，所有入选单株均携带有6个目标基因且基因型均全部纯合Pi5Pi5PitaPitaPid2Pid2Pid3Pid3bph2bph2；

（6）分株系种植F₆代种子，选择农艺性状优良的单株与三系不育系水稻进行测交，收获测交种以及对应测交单株形成F₆株系；

（7）种植测交种以及对应测交单株形成F₇代种子，选取杂种优势强、结实率和产量高以及植株株叶型整齐一致的对应单株，分单株收获种子形成F₈株系；

（8）利用稻瘟菌菌株分别对每个F₈代株系进行室内苗期抗性鉴定和田间穗瘟稻瘟病抗性鉴定，根据抗性鉴定结果，选取抗谱广、无抗感分离的株系中高抗的单株，分单株收获种子，形成 F₉株系；

（9）对F₉株系进行水稻苗期褐飞虱抗性鉴定；

（10）将褐飞虱抗性株系分单株全部种植，混合收获所有单株种子，根据NY/T 593-2013《食用稻品种品质标准》对候选株系的米质按标准进行分级，选择米质指标达二级米质以上的株系形成F₁₀株系；

（11）分株系种植F₁₀代种子，每个株系25-35个单株叶片混合提取DNA，利用水稻高密度基因芯片对其全基因组遗传背景进行分析，最终选择遗传背景100%纯合稳定的株系作为目标候选株系；

所述步骤（2）中分子标记引物如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；

所述步骤（3）中抗性基因Pi5对应的分子标记引物如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；

所述步骤（3）中抗性基因Pita对应的分子标记引物如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示；

所述步骤（3）中抗性基因Pid2对应的分子标记引物如SEQ ID NO.7-10所示；

所述步骤（3）中抗性基因Pid3对应的分子标记引物如SEQ ID NO.11-14所示；

所述步骤（5）中褐飞虱抗性基因bph2对应的分子标记引物如SEQ ID NO.15和SEQ IDNO.16所示。