[发明专利]人肠癌原代细胞及其培养方法、应用

说明书

本公开提供了人肠癌原代细胞及其培养方法和应用，该人肠癌原代细胞命名为人肠癌细胞HCOC‑685，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.21097。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及人肠癌原代细胞及其培养方法、应用。

背景技术

肠癌是消化系统肿瘤中常见的恶性肿瘤之一，严重危害人类健康。目前，为研究其发病机制和治疗方案，大多以商品化的细胞株为材料。但细胞株经长期培养，其生物学特性易发生变异而不利于发病机制和治疗方案的研究。

肿瘤原代细胞培养是指从肿瘤患者体内通过手术切除肿瘤组织，获得肿瘤细胞，并在体外进行短期培养的过程。与细胞株不同，原代培养的肿瘤细胞由于组织刚刚离体，其生物学特性未发生很大变化，仍保留原遗传特性，其性状与体内相似，适用于生化分子、药物敏感性及机制探究相关实验，其数据更具有说服力。可见，人肠癌原代细胞的培养尤为必要。

发明内容

本发明实施例提供了人肠癌原代细胞及其培养方法、应用。

为了达到上述目的，本发明是通过如下技术方案实现的：

第一方面，本发明提供了一种人肠癌原代细胞，命名为人肠癌细胞HCOC-685，已于2020年12月3日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(China GeneralMicrobiological Culture Collection Center，CGMCC)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码为100101，保藏编号为CGMCC NO.21097。

第二方面，本发明提供了培养上述第一方面所述的人肠癌原代细胞的方法，包括：

步骤1，用样本保存液保存收集的新鲜人肠癌组织；

其中，所述样本保存液包括胎牛血清、抗生素和DF培养基，所述抗生素包括青霉素、硫酸卡那霉素、两性霉素B和万古霉素；

步骤2，用清洗液清洗步骤1保存的肠癌组织；

其中，所述清洗液包括含所述抗生素的生理盐水；

步骤3，取步骤2清洗处理后的肠癌组织，用含血清培养基进行原代分离培养；

其中，所述含血清培养基包括胎牛血清、所述抗生素和DF培养基；

步骤4，取步骤3原代分离培养出的细胞，用无血清培养基进行纯化及传代培养，得到人肠癌原代细胞；

其中，所述无血清培养基包括添加物、所述抗生素和DF培养基；

所述添加物包括谷氨酰胺、胰岛素、转铁蛋白、亚硒酸钠、表皮生长因子(Epidermal Growth Factor，EGF)、烟酰胺Nicotinamide和B27。

详细地，DF培养基为本领域常见的DME/F-12 1:1培养基(美国HyClone)。B27为无血清液体添加剂。

优选地，所述无血清培养基包括：1-5mM谷氨酰胺、5-30mg/L胰岛素、5-20mg/L转铁蛋白、5-20μg/L亚硒酸钠、5-20μg/L EGF、5-30mM Nicotinamide、1-3％B27、10-60μg/mL青霉素、10-60μg/mL硫酸卡那霉素、0.15-0.5μg/mL两性霉素B、0.5-5μg/mL万古霉素。

优选地，所述含血清培养基包括：10-60μg/mL青霉素、10-60μg/mL硫酸卡那霉素、0.15-0.5μg/mL两性霉素B、0.5-5μg/mL万古霉素。

优选地，所述清洗液包括：0.1-0.8mg/mL青霉素、0.1-0.8mg/mL硫酸卡那霉素、1.5-5μg/mL两性霉素B、1-5μg/mL万古霉素。