[发明专利]一种检测黄曲霉毒素B1的无标记比率均相电化学传感方法

权利要求书

1.一种检测黄曲霉毒素B1的无标记比率均相电化学传感方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将一定浓度的hDNA溶液和AFB1适配体溶液混合，一定温度下孵育一定时间后，获得混合溶液A；

(2)向步骤(1)的混合溶液A中加入一定浓度的HP1溶液、HP2溶液、亚甲基蓝MB溶液、二茂铁Fc溶液以及不同浓度的AFB1标准液，一定温度下孵育一定时间后，获得混合溶液B；

当混合溶液B中不存在AFB1时，hDNA与Apt的杂交使HP1和HP2在溶液中保持发夹结构，此时，只有少量的MB嵌入到HP1和HP2中，大部分MB在溶液中是游离的，因此产生较大的I_MB；

当AFB1存在时，其与Apt的特异性识别导致hDNA的释放，并触发两个发夹DNA，即HP1和HP2的杂交链式反应，在溶液中形成长双链DNA序列；随着游离MB嵌入到双链DNA螺旋中，由于MB/双链DNA复合物具有较低的MB扩散速率，此时可以得到较低的I_MB；

而Fc在整个反应过程中始终保持游离态，I_Fc保持不变；

对混合溶液B通过三电极体系进行电化学信号扫描，以获得的MB氧化电流I_MB和Fc氧化电流I_Fc之比I_MB/I_Fc与不同黄曲霉毒素B1浓度的对数值绘制标准曲线，得到最佳线性检测范围；

(3)将步骤(2)中的AFB1标准液替换为待测AFB1溶液，经三电极体系进行电化学信号扫描后，将获得的I_MB/I_Fc值代入标准线性曲线，实现对黄曲霉毒素B1的精准检测。

2.根据权利要求1所述的一种检测黄曲霉毒素B1的无标记比率均相电化学传感方法，其特征在于，步骤(1)中，hDNA溶液的浓度为0.1～2.0μM，AFB1适配体溶液的浓度为0.1～2.0μM，hDNA溶液和AFB1适配体溶液的体积比为1:1，一定温度为20～37℃，一定时间为0.5～2小时。

3.根据权利要求1所述的一种检测黄曲霉毒素B1的无标记比率均相电化学传感方法，其特征在于，步骤(2)中，HP1溶液的浓度为0.1～2.0μM，HP2溶液的浓度为0.1～2.0μM，MB溶液的浓度为0.5～10.0μM，Fc溶液的浓度为1.0～20.0μM，HP1溶液、HP2溶液、MB溶液、Fc溶液和AFB1溶液的体积比为1：1：1：1：1；一定温度为20～37℃，一定时间为0.5～4小时。

4.根据权利要求1所述的一种检测黄曲霉毒素B1的无标记比率均相电化学传感方法，其特征在于，步骤(1)和(2)中，hDNA溶液和HP1溶液的体积比为1:1。

5.根据权利要求1所述的一种检测黄曲霉毒素B1的无标记比率均相电化学传感方法，其特征在于，步骤(2)中，所述AFB1在混合溶液B中的浓度为100pg/mL～100ng/mL。

6.根据权利要求1所述的一种检测黄曲霉毒素B1的无标记比率均相电化学传感方法，其特征在于，步骤(2)中，所述三电极体系的工作电极为裸玻碳电极或导电玻璃，对电极为铂丝电极，参比电极为Ag/AgCl电极；所采用测量方法为差分脉冲伏安法(DPV)或交流伏安法(ACV)，扫描电位为-0.5V～0.5V。