[发明专利]中枢神经系统感染病原体检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种中枢神经系统感染病原体检测试剂盒，其特征在于，包括反应液、逆转录引物、缓冲液1、缓冲液2、反应酶、内部质控、阳性质控以及稀释液，

所述逆转录引物包括依次对应人类肠道病毒、流感嗜血杆菌、EB病毒、肺炎链球菌、巨细胞病毒、无乳链球菌、单纯疱疹病毒1型、单核细胞增多性李斯特菌、单纯疱疹病毒2型、脑膜炎奈瑟菌、水痘带状疱疹病毒、双埃可病毒、格特隐球菌、腮腺炎病毒、新生隐球菌、人疱疹病毒6型、大肠杆菌K1以及金黄色葡萄球菌的第一至第十八逆转录引物组，每个引物组均包括正向引物和反向引物，序列如SEQ ID NO.1～36所示；

所述缓冲液1和缓冲液2中分别包括用于荧光检测的扩增引物组以及探针，

所述缓冲液1中包括依次对应人类肠道病毒、流感嗜血杆菌、EB病毒、肺炎链球菌、巨细胞病毒、无乳链球菌、单纯疱疹病毒1型、单核细胞增多性李斯特菌、单纯疱疹病毒2型、脑膜炎奈瑟菌、水痘带状疱疹病毒、双埃可病毒的第一至第十二扩增引物组以及第一至第十二探针，

所述缓冲液2中包括依次对应格特隐球菌、腮腺炎病毒、新生隐球菌、人疱疹病毒6型、大肠杆菌K1以及金黄色葡萄球菌的第十三至第十八扩增引物组以及第一探针、第三探针、第四探针、第六探针、第八探针和第九探针，所述第一至第十八扩增引物组均分别包括正向引物和反向引物，序列如SEQ ID NO.37～72所示，所述第一至第十二探针序列如SEQ IDNO.73～84所示。

2.根据权利要求1所述的中枢神经系统感染病原体检测试剂盒，其特征在于，

其中，所述反应液的规格为375μL，所述逆转录引物系统的规格为490μL，所述缓冲液1的规格为1050μL，所述缓冲液2的规格为1050μL，所述反应酶的规格为120μL，所述内部质控的规格为1000μL，所述阳性质控的规格为110μL，所述稀释液的规格为1700μL，

每种试剂管的管盖颜色不同。

3.根据权利要求2所述的中枢神经系统感染病原体检测试剂盒，其特征在于，

其中，所述反应液包括储存液和反应酶，所述储存液与所述反应酶的体积比为3:1，所述反应酶的浓度为5.00U/μL；

所述逆转录引物系统包括435.4μL的0.1*TE稀释液以及54.6μL的逆转录引物；

所述反应酶包括Taq酶以及DNA聚合酶；

所述内部质控包括浓度为10⁵pfu/μL的MS2噬菌体以及SMbuffer，MS2噬菌体溶液的体积百分比为0.1‰；

所述阳性质控包括超纯水、100×EDTA缓冲液、10mg/μL herring sperm以及10⁵c/μL质控人工合成片段，该质控人工合成片段为十八个病原体保守区域片段，每支阳性质控管由104.94μL超纯水、1.100μL EDTA缓冲液、0.110μL herring sperm以及3.85μL质控人工合成片段组成；

所述稀释液为超纯水，

所述内部质控中，MS2噬菌体的正、反向逆转录引物序列分别如SEQ ID NO.85和86所示，正、反向扩增引物序列分别如SEQ ID NO.87和88所示，探针序列如SEQ ID NO.89所示。