[发明专利]一种提高紫椴愈伤组织诱导率的培养基及培养方法

说明书

本发明公开了一种提高紫椴愈伤组织诱导率的培养基，包括：(1)诱导培养基1：在MS培养基的基础上添加2，4‑D，玉米素，KT，脯氨酸，亮氨酸，壳聚糖；和(2)诱导培养基2：在MS培养基的基础上添加2，4‑D，玉米素，KT，硫代硫酸钠，脯氨酸，酪氨酸，壳聚糖，活性炭粉；并且公开了培养方法。本发明培养基及方法可提高愈伤组织形成的速度和质量，进而提高繁育效率。

技术领域

本发明涉及植物繁殖技术领域，更具体的说是涉及一种提高紫椴愈伤组织诱导率的培养基及培养方法。

背景技术

紫椴(Tilia amurensis)属椴树科(Tiliaceae)椴树属(Tilia L.)，为我国II级珍贵保护树种，主产中国东北、内蒙古东部及黑龙江与乌苏里江流域，向南至朝鲜半岛。

紫椴木材质轻软，纹理致密通直，是市场上优良的胶合板用板及细木工板的重要材料；其生态价值也较高，因树形美观，花朵芳香，是较好的城市和庭院绿化树种。同时，紫椴也是著名的蜜源植物，为我国的特等优质蜜源。紫椴花、根等还可药用。因紫椴具有的工业、食用和药用等多种价值，其需求量逐渐增加。

然而，紫椴种播繁育发芽率低、周期长，扦插繁育较难生根、成活率低，因此，需要研究一种周期短、成活率高的紫椴繁育方法。

有研究人员采用紫椴芽为外植体，不经愈伤组织直接诱导芽分化，可以缩短培养周期，然而采用该方法繁育紫椴会影响后续生根速度、生根率以及移栽成活率，繁育效率较低。愈伤组织的形成对于芽、根的生长具有十分重要的作用，因此，亟待提供一种能够提高愈伤组织诱导效率的培养基及方法，保证紫椴繁育质量的同时提高繁育速度。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种提高紫椴愈伤组织诱导率的培养基及培养方法，可快速诱导紫椴愈伤组织形成，进而促进后续芽、根的良好发育，提高移栽成活率。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种提高紫椴愈伤组织诱导率的培养基，包括：

(1)诱导培养基1：

在MS培养基的基础上添加2，4-D 1-2mg/L，玉米素0.3-1.2mg/L，KT 0.1-0.2mg/L，脯氨酸15-25mg/L，亮氨酸0.5-1mg/L，壳聚糖0.2-0.5g/L；

和

(2)诱导培养基2：

在MS培养基的基础上添加2，4-D 2-3mg/L，玉米素0.8-1.8mg/L，KT 0.1-0.2mg/L，硫代硫酸钠0.1-0.2g/L，脯氨酸30-40mg/L，酪氨酸20-30mg/L，壳聚糖0.8-1.2g/L，活性炭粉0.3-0.6g/L。

本发明采用两种诱导培养基对紫椴外植体进行诱导，可促进愈伤组织快速形成；其中，诱导培养基1中添加脯氨酸、亮氨酸、壳聚糖，可刺激外植体改变原有分化方向和代谢方式，加强代谢活动，并且降低外植体污染几率；诱导培养基2中添加硫代硫酸钠、脯氨酸、酪氨酸、壳聚糖、活性炭粉，可促进植物组织脱分化，并且避免褐化，提高出愈率。

优选地，活性炭粉粒度为200-300目。适当粒度的活性炭粉可保证在培养基内分布的均匀性，与硫代硫酸钠、壳聚糖相配合，在不影响植物组织营养吸收的同时减少创伤处有害物质的积累。

一种提高紫椴愈伤组织诱导率的培养方法，包括如下步骤：

1)取2-3年生紫椴具有腋芽的嫩枝段，消毒，剪至2.5-3.5cm长，作为外植体；

2)将外植体接种于诱导培养基1上，20±2℃暗培养3-5d；

3)将步骤2)暗培养后的外植体转移到诱导培养基2上，25±2℃继续暗培养10-14d。