[发明专利]一种(S)-1，2，4-丁三醇的制备方法

权利要求书

1.一种(S)-1，2，4-丁三醇的制备方法，其特征在于，所述方法包括步骤：使含有1,4-二羟基-2-丁酮与酮还原酶-葡萄糖脱氢酶共固定化酶的混合体系反应得到(S)-1，2，4-丁三醇；

所述混合体系的pH为6-7.5；

反应温度为25-45℃；

所述1,4-二羟基-2-丁酮浓度为10-250g/L；

所述混合体系中还含有磷酸缓冲液、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)、葡萄糖脱氢酶、酮还原酶固定化酶和葡萄糖；

所述酮还原酶-葡萄糖脱氢酶共固定化酶通过下述步骤制备得到：

(i)将酮还原酶粗酶液和葡萄糖脱氢酶混合得到酮还原酶与葡萄糖脱氢酶的混合液；

(ii)将酮还原酶与葡萄糖脱氢酶的混合液和预处理的载体树脂混合，得到酮还原酶-葡萄糖脱氢酶共固定化酶；所述预处理的载体树脂通过下述步骤制备得到：将载体树脂与缓冲液混合后过滤抽干，然后加入含有戊二醛的缓冲液，混合后得到预处理的载体树脂；

所述酮还原酶的核苷酸序列为SEQ ID NO:1。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述混合体系的pH为6-7。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述混合体系的pH为6.5-7.0。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述反应温度为30-45℃。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述反应温度为35-40℃。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，以混合体系的总体积计，所述1,4-二羟基-2-丁酮浓度不超过200g/L。

7.一种酮还原酶-葡萄糖脱氢酶共固定化酶的制备方法，其特征在于，所述方法包括步骤：

(1)将酮还原酶粗酶液和葡萄糖脱氢酶混合得到酮还原酶与葡萄糖脱氢酶的混合液；

(2)将酮还原酶与葡萄糖脱氢酶的混合液和预处理的载体树脂混合，得到酮还原酶-葡萄糖脱氢酶共固定化酶；所述预处理的载体树脂通过下述步骤制备得到：将载体树脂与缓冲液混合后过滤抽干，然后加入含有戊二醛的缓冲液，混合后得到预处理的载体树脂；

所述酮还原酶的核苷酸序列为SEQ ID NO:1。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述酮还原酶粗酶液通过下述步骤制备得到：使酮还原酶基因工程菌进行发酵培养得到的菌体裂解得到酮还原酶粗酶液。

9.如权利要求7或8所述的制备方法，其特征在于，所述载体树脂经过戊二醛处理得到含有醛基的载体，含有该基团的载体以共价键与酶连接，形成固定化酶。

10.一种通过如权利要求7-9任一项所述的制备方法得到的酮还原酶-葡萄糖脱氢酶共固定化酶。

11.一种如权利要求10所述的酮还原酶-葡萄糖脱氢酶共固定化酶在合成(S)-1，2，4-丁三醇中的应用。