[发明专利]一种靶向EphA2抗原的癌症疫苗

说明书

本发明涉及癌症的免疫治疗和预防领域，特别涉及靶向EPHA2的肿瘤疫苗。本发明通过将EPHA2蛋白与DC细胞配体XCL1融合表达，提高了EPHA2蛋白被DC细胞吞噬、加工、呈递的效率，改善了其抑制肿瘤生长的效果。经由实验验证，本发明的核酸疫苗表达的蛋白可以有效地诱导EPHA2特异性T细胞反应并在动物肿瘤模型中显著抑制高表达EPHA2的肿瘤的生长。

技术领域

本发明涉及免疫治疗技术领域，特别涉及一种靶向EphA2的抗原疫苗及其制备方法。

背景技术

癌症是一个世界性的重大公共卫生问题，其发病率不断上升，预计到2025年，全球每年新增癌症病例将达4.2亿例。尽管癌症的临床治疗取得了很大进展，每年全球仍有数百万人死于癌症，癌症治疗的改善仍然任重道远。

EphA2在多种癌症中大量表达，如前列腺癌、肺癌、食管癌、结肠直肠癌、宫颈癌、卵巢癌、乳腺癌和皮肤癌，但在大多数正常成人组织中的相对低表达，因此EphA2是癌症的理想的潜在治疗靶点。EphA2受体是一种130 kDa的跨膜糖蛋白，EphA2-ephrin A1信号调节在肿瘤发生中起重要作用。此外，EphA2的表达与肿瘤患者的预后不良、转移潜能升高和生存率降低有关。经过30余年的研究，EphA2的作用机理逐渐明朗，一些靶向EphA2的药物已经用于癌症治疗临床研究。目前针对EphA2的治疗方法有：降低EphA2表达，促进EphA2降解，阻断内源性EphA2激活，EphA2作为药物递送靶点，基于EphA2的免疫治疗和基于EphA2的联合治疗。其中，依靠增强患者的免疫防御来对抗肿瘤细胞的免疫疗法已成为癌症治疗中的极具前景一种新型疗法。例如，将负载EphA2来源的短肽的树突状细胞（dendritic cell，DC）免疫大肠癌动物模型后，可提高EphA2特异性细胞毒性T细胞（cytotoxic T lymphocyte,CTL）活性和抗瘤能力；过继性输注EphA2特异性的T细胞可杀死EphA2阳性肿瘤细胞的，且抑制体内肺癌的发生。尽管上述疗法能够激活抗瘤免疫反应，但其效果有限，不足以提供有效的抗瘤保护。

大多数免疫治疗方法对CTL的激活依赖于呈递肿瘤相关抗原的成熟DC。其中，I型常规DC（conventional DC1，cDC1）可通过交叉呈递作用从死细胞中摄取抗原并经由MHC-I分子进行呈递，进而激活并扩增特异性的CTL。CD103+ DC1是一种非常重要的cDC1，具备迁移能力，可携带肿瘤抗原至引流淋巴结进行交叉呈递, 其表面表达XCL1受体(XCR1),可被XCL1分子吸引。因此，可通过XCL1融合EphA2蛋白，增加CD103+ DC与EphA2抗原的接触，从而增强cDC1对自然杀伤细胞（natural killer cell，NK）和CD8+ CTL的抗原提呈和免疫活化，增强免疫应答，提供更有效的抗肿瘤保护。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种新的靶向EPHA2的抗原疫苗及其制备方法；具体地，本发明提供了一种靶向EPHA2的核酸和蛋白疫苗，通过将cDC1配体XCL1与EPHA2蛋白融合表达，提高了DC对EPHA2蛋白的吞噬和呈递的效率，增强了EPHA2特异性的CD8+ CTL反应，改善了高表达EPHA2的肿瘤的抑制效果。

本发明提供了融合蛋白，包括EPHA2能够诱发特异性CD8+T反应的或其MHCI类分子结合表位优化形式的胞外区的氨基酸序列；接头；以及特异性结合具有抗原交叉呈递能力的DC细胞的人或鼠XCL1蛋白；

其中：

（Ⅰ）、所述EPHA2能够诱发特异性CD8+T反应的或其MHCI类分子结合表位优化形式的胞外区具有如SEQ ID No.1或2所示的氨基酸序列；所述特异性结合具有抗原交叉呈递能力的DC细胞的人或鼠XCL1，如SEQ ID No.3或4所示；

或

（Ⅱ）、如（Ⅰ）所述的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或两个氨基酸残基获得的氨基酸序列，且与（Ⅰ）所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；

或