[发明专利]一种抗体耦联药物及其应用

权利要求书

1.一种抗体耦联药物，为抗体上耦联有药物海兔毒素，其特征在于，

所述抗体包括9G8纳米抗体、7D12纳米抗体和IgG1型抗体的Fc，其中IgG1型抗体的Fc为双链结构，

9G8纳米抗体和7D12纳米抗体融合后再与IgG1型抗体的Fc融合，且双链结构的Fc两条链各自融合一分子的9G8纳米抗体和7D12纳米抗体，

9G8纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，

7D12纳米抗体的氨基酸序列是由如SEQ ID No.3所示序列将第7位或第71位丝氨酸突变为半胱氨酸后用于耦联海兔毒素，

IgG1型抗体的Fc的氨基酸序列如SEQ ID No.7所示，

所述抗体耦联药物的DAR值为1~2。

2.如权利要求1所述的抗体耦联药物，其特征在于，9G8纳米抗体的C端与7D12纳米抗体的N端融合，7D12纳米抗体的C端与Fc的N端融合。

3.如权利要求2所述的抗体耦联药物，期特征在于，9G8纳米抗体与7D12纳米抗体之间通过柔性连接肽连接，柔性连接肽为(GGGGS)n，其中n为1~3的自然数。

4.如权利要求3所述的抗体耦联药物，其特征在于，抗体的两条链中，未将其中7D12纳米抗体的第7位或第71位丝氨酸突变为半胱氨酸之前的单条链的氨基酸序列如SEQ IDNo.9所示。

5.如权利要求4所述的抗体耦联药物，其特征在于，还将Fc的氨基酸序列第215位由E突变为G。

6.如权利要求1~5任一所述抗体耦联药物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）通过重组表达、纯化获得所述抗体，

（2）使用还原剂处理使抗体的链间二硫键打开，再用氧化剂使链间二硫键重新连接，

（3）将mc-vc-MMAE与抗体反应，使马来酰亚胺基团与巯基发生迈克尔加成反应，获得耦联上药物的抗体耦联药物。

7.如权利要求1~5任一所述抗体耦联药物在制备抗肿瘤药物中的应用，

所述抗肿瘤药物针对的肿瘤类型为EGFR阳性的实体瘤。