[发明专利]一种共载HBx-siRNA和五味子油的阳离子脂质体纳米粒、制备方法及其用途

说明书

本发明涉及纳米药物技术领域，具体涉及一种共载HBx‑siRNA和五味子油的阳离子脂质体纳米粒、制备方法及其用途。本发明建立针对HBx的小干扰RNA，选取具有保肝作用的五味子油，利用阳离子脂质体可以同时装载水溶性物质和脂溶性物质的特性，将两者同时装载于阳离子脂质体内，对其制备工艺进行优化，并对最优工艺下制备出的共载HBx‑siRNA和五味子油的阳离子脂质体纳米粒进行体外抑制乙型肝炎的药效学研究。实验证明，在阳离子脂质体纳米粒中五味子油具有良好的协同HBx‑siRNA抑制乙型肝炎的作用。

技术领域

本申请涉及纳米药物技术领域，具体涉及一种共载HBx-siRNA和五味子油的阳离子脂质体纳米粒、制备方法及其用途。

背景技术

脂质体是由天然或合成磷脂和胆固醇构成，拥有很好的生物相容性。胆固醇主要功能是可以调整脂质双分子层的流动性，使该载体更为稳固。由两层磷脂分子排列形成可以同时包裹水溶性成分及脂溶性成分球体。脂质体介导制备简单，原料无毒副作用，可以防止目的基因被核酶的降解。阳离子脂质体的亲水基团和疏水基团是阳离子脂质体重要组成部分，含有负电荷DNA/RNA可与含正电荷的阳离子头部在静电作用下转运穿过细胞膜，形成的静电则是其主要力量；而疏水基团可增加在机体里的循环时间并且是构成其稳固性重要因素。阳离子脂质体用作运输载体的优点有：1)可以确保目的基因在机体内不被降解。2)可以靶向性的将目的基因送达至靶组织或细胞。3)可以高效的通过细胞以及核膜，整合到宿主细胞内，使靶mRNA基因表达沉默。4)可以同时装载脂溶性和水溶性药物。

五味子为木兰科(Magnoliaceae)植物五味子的干燥成熟果实，五味子特指为北五味子。目前对于五味子化学成分中木质素、多糖、挥发油等有更多的研发。五味子酚经过加强血清中SOD活性并且除去脂质的MDA来阻挡自由基等氧化损伤而起到抗氧化的效果。五味子油中含有大量的五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲等成分。研究发现五味子甲素和五味子乙素是治疗肝损伤的主要活性成分，五味子甲素可以抑制转氨酶的释放，促进受损肝细胞恢复，使肝细胞再生。研究表明五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素可以改善肝功能、减轻肝细胞脂质过氧化损伤的作用，是保肝作用的主要物质基础。

乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒诱发的以肝脏病变为主的传染性疾病。乙型肝炎可逐渐发展为慢性乙型肝炎、肝硬化、肝细胞癌，也可引发肝外病变。乙型肝炎病毒可自身进行复制并可进行逆转录过程，因此病毒基因组可整合到机体中，使病毒在机体中难以彻底清除且存在潜在的致癌隐患。成熟乙型肝炎病毒可入侵其他健康肝脏细胞内，不断的复制、侵袭，导致免疫受损。基因治疗是当今医治乙型肝炎的新式方法，此方法可以完全除去体内的乙型肝炎病毒，可以彻底医治乙型肝炎以及由乙型肝炎引发的其他并发症。RNA干扰技术是当今医治乙型肝炎的新兴基因治疗方法。siRNA技术是目前应用最广泛的RNAi技术，并广泛应用于抗乙型肝炎的治疗。脂质体作为一种非病毒载体，具有无传染性、无载体容量制约、化学结构可操控，无致瘤危险和抗原性，可同时装载水溶性物质和脂溶性物质的特点。利用此特点，在装载了siRNA水溶性药物的同时，希望选取一种脂溶性药物，能够达到协同治疗乙型肝炎的作用。

发明内容

本发明建立针对HBx的小干扰RNA，选取具有保肝作用的五味子油，利用阳离子脂质体可以同时装载水溶性物质和脂溶性物质的特性，将两者同时装载于阳离子脂质体内，对其制备工艺进行优化，并对最优工艺下制备出的共载HBx-siRNA和五味子油的阳离子脂质体纳米粒进行体外抑制乙型肝炎的药效学研究。

为了实现上述技术目的，本发明采用了如下技术方案：

一种共载HBx-siRNA和五味子油的阳离子脂质体纳米粒，所述纳米粒包括HBx-siRNA、五味子油和阳离子脂质体；所述阳离子脂质体的膜材包括(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化铵(DOTAP)和胆固醇(CHOL)。

优选的，所述DOTAP与CHOL的质量比为2:1-4:1。

优选的，所述阳离子脂质体纳米粒的粒径为134nm，Zeta电位为44mV。