[发明专利]一种适配体分子探针修饰的多孔微针贴片及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种适配体分子探针修饰的多孔微针贴片及其制备方法和应用，制备方法包括以下步骤：步骤一、制备PDMS针状孔微针阵列模板；步骤二、将造孔剂表面包覆上一层生物粘合剂，制得造孔材料；步骤三、将所述造孔液和微针原材料溶液分步依次灌注入PDMS针状孔微针阵列模板中，待造孔液和微针原材料溶液固化后进行剥离处理，得到含造孔材料的微针贴片；步骤四、制备多孔微针贴片：将含造孔材料的微针贴片与造孔刻蚀剂进行反应，造成孔洞，制得多孔微针贴片；步骤五、制备适配体分子探针修饰的多孔微针贴片：将多孔微针贴片和适配体分子探针在缓冲液中反应，得到适配体分子探针修饰的多孔微针贴片。本发明具有简单、方便、高效等优点。

技术领域

本发明属于生物医用材料技术领域，涉及一种微针贴片，尤其涉及一种适配体分子探针修饰的多孔微针贴片及其制备方法和应用。

背景技术

随着现代医学的进步和人民生活水平的提高，人们对临床检测的需求量日益增加。体液检测是一种较常见的临床检测类型，其中血液检测占比最大。血液检测的采样通常使用注射器或真空采血管进行。但这种抽样方法往往给患者带来痛苦和心理压力，并且这些影响可能会导致某些生理指标发生波动，从而降低测试结果的准确性。微针阵列是一种很具有创新性的微结构材料，近年来已经被开发用于体液采样。然而，常见的微针阵列在制造过程中通常需要复杂的微加工技术，制造成本高，并且常需要例如体液回收等后续处理。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明提供一种适配体分子探针修饰的多孔微针贴片及其制备方法和应用，通过微针原材料的亲水作用以及微针的多孔结构提取皮肤间质液，并且基于孔壁上固定的适配体分子探针捕获皮肤间质液中的内毒素，有利于提高皮肤间质液内毒素检测的效率，并且简化了操作步骤。

为实现上述目的，本发明提供一种适配体分子探针修饰的多孔微针贴片的制备方法，具有这样的特征：包括以下步骤：

步骤一、制备PDMS针状孔微针阵列模板：将PDMS(Polydimethylsiloxane)和固化剂配制成待固化PDMS，PDMS和固化剂的质量比为10∶1；然后将该待固化PDMS转移到在ETPTA(Ethoxylated trimethylolpropane triacrylate)微针阵列阳模板表面；将该体系抽真空处理15分钟，然后在70-80℃下加热固化；冷却后进行剥离处理，制得PDMS针状孔微针阵列模板；

步骤二、制备造孔材料：将造孔剂表面包覆上一层生物粘合剂，制得造孔材料；

步骤三、制备含造孔材料的微针贴片：将微针原材料溶液和造孔材料混合配制成造孔液，造孔材料的质量体积百分数为12％；然后将所述造孔液和微针原材料溶液(另一微针原材料溶液，非造孔液中的微针原材料溶液)分步依次灌注入PDMS针状孔微针阵列模板中，造孔液和微针原材料溶液的灌注体积比为130∶400；待造孔液和微针原材料溶液固化后进行剥离处理，得到含造孔材料的微针贴片；

步骤四、制备多孔微针贴片：将含造孔材料的微针贴片与造孔刻蚀剂进行反应，造成孔洞，制得多孔微针贴片；具体方法为：将含造孔材料的微针贴片浸泡在造孔刻蚀剂中进行反应12小时，待反应结束后，造孔完成，得到多孔微针贴片；

其中，造孔剂为可被造孔刻蚀剂腐蚀的微球颗粒；

步骤五、制备适配体分子探针修饰的多孔微针贴片：将多孔微针贴片和适配体分子探针在缓冲液中反应；缓冲液为PBS缓冲液，浓度为0.01M，pH为7.2-7.4；缓冲液的用量为满足浸没多孔微针贴片；适配体分子探针在反应体系中的浓度为1μM；利用生物粘合剂的粘性将适配体分子探针连接在多孔微针贴片的孔壁上，然后用封闭液进行封闭处理，减少后续检测中的非特异性吸附，得到适配体分子探针修饰的多孔微针贴片。

进一步，本发明提供一种适配体分子探针修饰的多孔微针贴片的制备方法，还可以具有这样的特征：其中，步骤二中，所述造孔剂为硅酸盐微球或玻璃微珠，直径为20-50μm；步骤四中，所述造孔刻蚀剂为氢氟酸溶液，体积百分数为20％。