[发明专利]样本核酸保存液及核酸提取方法和应用

说明书

本发明公开了样本核酸保存液及核酸提取方法和应用。本申请的第一方面，提供样本核酸保存液，包括1.5～2.5m/v％的阳离子表面活性剂、50～75mmol/L的缓冲剂、10～15mmol/L的螯合剂、500～1000mmol/L的盐。本申请所提供的保存液成分非常简单，既可以有效保存样本，又能完成细胞裂解和核酸释放，有效避免了保存液和裂解液在“组分”上的不兼容和“功能”上重复的问题。

技术领域

本申请涉及核酸提取技术领域，尤其是涉及样本核酸保存液及核酸提取方法和应用。

背景技术

传统的基因组DNA提取方法有酚-氯仿抽提法、碱抽提法、离子交换柱法以及磁珠吸附法等，其中磁珠吸附法更易实现自动化。大规模核酸检测过程中，采样得到的拭子样本往往不能立即进行检测，而需要先保存或运输一段时间。为了避免样本中的核酸分解导致假阴性，在采样完成后一般需先将样本置于保存液中暂存。因此现行的磁珠类核酸提取方法都是以拭子保存液作为核酸提取的样本，再进行后续的细胞裂解。然而，不同保存液和裂解液在组成上有明显的差异，无法保证二者可以良好兼容；且两种溶液的混合使得整个体系的组分变得异常复杂，极可能造成后续步骤难以效去除溶液中的杂质，甚至影响到磁珠与核酸的结合，造成所得DNA质量不能满足后续实验的要求。因此，有必要提供一种同时兼具样品保存和细胞裂解功能的保存液。

发明内容

本申请旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本申请提供一种兼具样品保存和细胞裂解功能的保存液。

本申请的目的还在于提供一种保存样本核酸的方法。

本申请的目的还在于提供一种核酸释放和/或保存试剂盒。

本申请的目的还在于提供一种核酸提取试剂盒。

本申请的目的还在于提供一种核酸提取方法。

本申请的第一方面，提供样本核酸保存液，包括1.5～2.5m/v％的阳离子表面活性剂、50～75mmol/L的缓冲剂、10～15mmol/L的螯合剂、500～1000mmol/L的盐。

根据本申请实施例的样本核酸保存液，至少具有如下有益效果：

通过合适浓度的缓冲剂为采集到的样本提供能够有效稳定核酸结构的环境。在此基础上，选择特定质量体积百分数的阳离子表面活性剂诱导蛋白质发生变性，并辅以一定浓度范围的盐调节渗透压，起到裂解细胞和释放核酸的作用。另一方面，添加的特定浓度的螯合剂能够在有效结合Mg²⁺等二价金属离子、抑制核酸酶的活性的同时，避免了使用核酸抑制剂所引起的影响后续纯化反应的问题。因此，本申请所提供的保存液成分非常简单，既可以有效保存样本，又能完成细胞裂解和核酸释放，有效避免了保存液和裂解液在“组分”上的不兼容和“功能”上重复的问题。

其中，m/v％是指质量体积浓度，表示单位体积溶液中所含的溶质的质量，具体为：以溶液体积为100mL计，其中含有的溶质的质量(g)。而v/v％是指体积百分数，表示溶质体积与溶液总体积的百分比。

在本申请的一些实施方式中，阳离子表面活性剂选自十二烷基二甲基苄基氯化铵、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)中的至少一种。

在本申请的一些实施方式中，阳离子表面活性剂为十六烷基三甲基溴化铵。

在本申请的一些实施方式中，缓冲剂选自柠檬酸盐、磷酸盐、醋酸盐、Tris-HCl中的至少一种。其中，柠檬酸盐、磷酸盐、醋酸盐的阳离子的非限制性实例包括钠盐、钾盐等。

在本申请的一些实施方式中，缓冲剂为Tris-HCl。