[发明专利]负载Tax抗原的DC细胞、CTL细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种负载Tax抗原的DC细胞、CTL细胞及其制备方法和应用。本发明首先提供了一种负载Tax抗原的DC细胞，其是将CD3‑EGFR融合基因和编码Tax抗原的pX基因克隆至慢病毒载体上转染DC细胞而得到的呈递Tax抗原的DC细胞。本发明进一步将负载Tax抗原的DC细胞与自体PBMC细胞共培养获得大量高活性CTL细胞。杀伤实验证明，此群CTL细胞可高效杀灭携带Tax抗原的靶细胞。

技术领域

本发明属于细胞免疫治疗技术领域，具体而言，是关于一种负载Tax抗原的DC细胞、CTL细胞及其制备方法和应用。

背景技术

成人T细胞白血病/淋巴瘤（ATL）是一种顽固的成熟T细胞恶性肿瘤，具有多种临床特征，在病因学上与称为I型人T细胞白血病病毒（HTLV-1）的逆转录病毒相关。HTLV-1病毒感染在日本的西南地区，中南美洲，中非，中东，远东，澳大利亚中部和罗马尼亚等地比较多。中国属于HTLV低流行区，但在中国福建、广东等沿海地区发现有局部集中的HTLV-1的感染。

HTLV-1是一种致癌性逆转录病毒，感染了全球1000至2000万人。在这些感染人群中，有1-6％的感染者会发展为T细胞白血病/淋巴瘤（ATL / ATLL），另外2-3％的感染者会患上各种慢性炎症综合症，包括HTLV-1相关性脊髓病/热带痉挛性轻瘫（HAM / TSP）；其余仍为该病毒的终身无症状携带者。ATL可通过化疗、同种异体造血干细胞移植等手段进行治疗，但整体预后不佳。临床上急需寻找更多的治疗手段。

免疫治疗是近年来肿瘤治疗领域的一大突破，针对ATL的免疫治疗也逐渐开展起来。有研究表明，多数感染HTLV-1病毒的人群都会产生针对HTLV-1病毒的强烈的CD8 + T细胞应答，其中包含针对HTLV-1病毒基因pX编码的Tax蛋白的CD8+T细胞。

CN109535231A 中公开了人T细胞病毒抗原蛋白Tax的CTL(细胞毒性T淋巴细胞)特异性识别表位及其应用，表位肽以抗原蛋白Tax为靶标设计，为抗原蛋白Tax的HLA-A*0201限制性CTL识别表位肽，但是其是用计算机模拟的方式寻找到Tax全蛋白里与HLA匹配的多肽片段进行验证和应用。此种方法的不足之处在于：（1）预测的准确性不够；（2）不同HLA（如HLA-A11, A24, B**）都需要通过类似的方法去预测，工作量大，效率不高；（3）预测出的多肽通过DC细胞进行递呈，DC细胞只适用于HLA-A2阳性的患者，且效用受预测准确度、DC细胞数量、活性和多肽负载效率的影响；（4）细胞不可再生，属于耗竭型产品。此外，DC细胞的负载效率和对T细胞的激活作用受DC细胞活性的影响，但是目前的DC细胞普遍存在活性差，难以扩增等问题。

因此，需要开发一种DC细胞活性高、容易扩增、内源性表达并呈递Tax蛋白的任意多肽并适用于任何HLA类型人群的针对人T细胞白血病/淋巴瘤的通用型DC细胞疫苗。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种新的针对HTLV-1病毒基因pX编码的Tax抗原的细胞免疫治疗技术。

为实现上述目的，本发明提供了一种负载Tax蛋白抗原的DC细胞。

由此，本发明首先提供了一种负载Tax整个蛋白抗原的方法，将CD3-EGFR融合基因和编码Tax抗原的pX基因序列分别插入到慢病毒载体上，通过慢病毒转染的方式使DC细胞负载并呈递Tax抗原。进一步，本发明使所得负载Tax的DC细胞与配体PBMC细胞（HLA-A2.1）进行共培养，以得到Tax抗原特异性的T细胞群，经验证具有高效的杀伤作用。

从而，一方面，本发明提供了一种负载Tax抗原的DC细胞，其是将CD3-EGFR融合基因和编码Tax抗原的pX基因分别克隆至慢病毒载体上转染DC细胞而得到的呈递Tax抗原的DC细胞。

根据本发明的具体实施方案，本发明的负载Tax抗原的DC细胞中，所述Tax抗原包括SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；优选地，所述编码Tax抗原的pX基因包括SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。