[发明专利]一种柑桔溃疡病菌的PCR检测用引物组、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种柑桔溃疡病菌的PCR检测用引物组，其特征在于，所述引物组包括上游引物及下游引物，其中上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；下游引物的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。

2.一种柑桔溃疡病菌的PCR检测试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1或2所述的引物组。

3.如权利要求2所述的PCR检测试剂盒，其特征在于，还包括扩增反应液2xPremix Taq和1-2μg/ml的阳性对照。

4.如权利要求2所述的PCR检测试剂盒，其特征在于，所述上游引物、下游引物以混合液的形式存在，均溶解在同一TE缓冲液中。

5.如权利要求2所述的PCR检测试剂盒，其特征在于，所述上游引物的工作浓度为10μmol/L，下游引物的工作浓度为10μmol/L。

6.一种不以疾病诊断为目的的柑桔溃疡病菌的PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.提取DNA作为反应的模板；

S2.采用权利要求1所述的引物进行PCR检测。

7.如权利要求6所述的PCR检测方法，其特征在于，步骤S1中，所述提取DNA的步骤包括：

1)采集待测样本：将待测样本充分研磨至粉末状，得到研磨样品；

2)提取样本基因组：采用磁珠法提取研磨样品中的DNA，获得待测样本的模板DNA。

8.如权利要求7所述的PCR检测方法，其特征在于，步骤1)中，所述待测样本为植物发病部位组织或干重组织，将待测样本加入液氮后充分研磨至80-100微米；所述植物发病部位组织或干重组织与液氮的重量比例为1：(0.8-2)。

9.如权利要求7所述的PCR检测方法，其特征在于，步骤2)中，所述磁珠法是通过植物基因组DNA提取试剂盒进行的。

10.如权利要求7所述的实时荧光PCR检测方法，其特征在于，步骤S2中，所述PCR检测反应体系为25μL；其中模板DNA 2μl，扩增反应液2xPremix Taq，12.5μl；10μmol/L权利要求1所述的引物各1μL，和无菌水8.5μL。

11.如权利要求10所述的PCR检测方法，其特征在于，步骤S2中，所述PCR检测的反应程序为：95℃预变性4min；95℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环；72℃继续延伸10min，4℃下保存。