[发明专利]用于测试拉喹莫德在治疗缺血性脑卒中的作用的方法

说明书

本发明特别是公开了一种用于测试拉喹莫德在治疗缺血性脑卒中的作用的方法，先建立急性缺血性脑卒中小鼠模型，然后进行行为学试验和冰冻切片，行为学试验包括圆筒试验和网格爬行试验，使用以上2种行为学试验测定小鼠各阶段的运动功能，以评估Sham组，IS组和LQ给药组的运动功能相关指标；冰冻切片可用于尼氏染色和TUNEL细胞凋亡试剂盒染色，观察小鼠病灶区尼氏染色的图像和TUNEL细胞凋亡免疫染色的图像。采用上述结构，提供了一种能验证拉喹莫德具有促进急性缺血性脑卒中后的恢复作用的方法。

技术领域

本发明涉及用于测试拉喹莫德在治疗缺血性脑卒中的作用的方法。

背景技术

脑卒中，俗称中风，是由脑部血管受损导致的脑组织损伤。具有死亡率高、发病率高、致残率高点的特点，对人们的生命和健康造成严重威胁，是神经功能障碍和死亡的重要原因。脑卒中按照病因可分为出血性脑卒中和缺血性脑卒中，其中，缺血性脑卒中在临床上最为常见，约占我国脑卒中的60％-80％。

缺血性脑卒中指因脑的供血动脉(颈动脉和椎动脉)狭窄或闭塞，引起脑部的血液供应不足，使得局部脑组织发生缺血、缺氧而坏死或软化，进而导致神经功能障碍的疾病。神经元比邻近的星形胶质细胞更容易受到缺血性损伤，星形胶质细胞是复杂的高分化细胞，以连续的方式分布在中枢神经系统中，并对健康中枢神经系统的正常功能做出许多重要贡献，包括调节血流、向神经元提供能量代谢物、参与突触功能和可塑性以及维持细胞外离子、液体和递质平衡。此外，星形胶质细胞通过通常称为反应性星形胶质细胞增生的过程对所有形式的中枢神经系统损伤(如感染、创伤、缺血和神经退行性疾病)做出反应，这涉及其分子表达和形态的变化，在严重情况下，还涉及疤痕形成，在卒中后的晚期恢复阶段，胶质瘢痕可能阻碍轴突再生，并随后降低功能结果。尽管治疗缺血性脑卒中的药物越来越多，但是除了阿司匹林和在极少数急性缺血性脑卒中患者中进行溶栓治疗外，尚未证实任何其他药物干预对大多数急性缺血性脑卒中患者有效。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供了一种能验证拉喹莫德具有促进急性缺血性脑卒中后的恢复作用的方法。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种用于测试拉喹莫德在治疗缺血性脑卒中的作用的方法，具体方法如下：

(1)先建立急性缺血性脑卒中小鼠模型

1)选用成年野生型雄性ICR小鼠，周龄为6-8周，重量约为25±2g，在温度25±2℃、湿度70±5％和光照12h:黑暗12h循环情况下，于无病原体饲养中心培养小鼠；

2)采用光化学栓塞法制作小鼠脑缺血模型，共设Sham组、IS3d组、IS5d组、IS 3d+LQ-25mg/kg组、IS 3d+LQ-50mg/kg组、IS5d+LQ-25mg/kg组、IS 5d+LQ-50mg/kg组7组；

3)按随机数表法，将70只周龄为8周的ICR小鼠进行分组，除Sham组外，其余各组小鼠腹腔注射浓度为10mg/ml的玫瑰红100mg/kg，5分钟后，腹腔再注射浓度为5％的水合氯醛200mg/kg，麻醉后，对小鼠进行缺血手术，小鼠脑立体定位于S1FL区；

4)缺血手术结束后30分钟，向IS3d+LQ-25mg/kg组、IS 3d+LQ-50mg/kg组、IS5d+LQ-25mg/kg组以及IS 5d+LQ-50mg/kg组小鼠灌胃Laquinimod-L12699；

5)术后密切观察各组小鼠生命体征，造模完毕后将小鼠置于37℃热板复苏，待苏醒后将其置于鼠笼饲养；

(2)进行行为学试验和冰冻切片

行为学试验包括圆筒试验和网格爬行试验，使用以上2种行为学试验测定小鼠各阶段的运动功能，以评估Sham组，IS组和LQ给药组的运动功能相关指标；