[发明专利]一种CAR-CXCL12 T淋巴细胞及其制备方法

说明书

本发明提出了一种CAR‑CXCL12T淋巴细胞及其制备方法，属于基因工程技术领域，所述T细胞的表达靶向CXCR4的嵌合抗原受体为CAR‑CXCL12，其基因序列见SEQ ID NO.1。本发明通过基因芯片筛选靶点CXCR4，针对靶点CXCR4制备了其嵌合抗原受体CXCL12，感染制备T淋巴细胞，通过体外杀伤实验、荷瘤大鼠动物实验后显示了优越的抗肿瘤治疗的疗效且未发现明显的不良反应。同时，这是一种广谱的肿瘤细胞治疗方法。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种CAR-CXCL12 T淋巴细胞及其制备方法。

背景技术

嵌合抗原受体基因修饰T(chimeric antigen receptor gene-modified T，CART)细胞疗法是当前肿瘤免疫细胞治疗的研究热点及重点。它将抗体对肿瘤抗原的高度亲和性和T淋巴细胞的杀伤机制有机结合，使CAR-T能特异性地识别肿瘤细胞，还能不依赖MHC的限制性而直接杀伤肿瘤细胞。有研究表明，它在血液系统肿瘤治疗已经取得重要进展，并且正在逐渐延伸到实体瘤的临床治疗中，有望攻克实体瘤治疗的难关。嵌合型抗原受体(chimeric antigen receptor，CAR)是一种融合分子，由胞外抗原结合区，跨膜区及与T细胞受体(T cell receptor，TCR)的胞内信号区构成。其中胞外抗原结合区是赋予CAR-T细胞识别特定肿瘤抗原的关键部分，它源于抗体的抗原结合基序，具备连接VH和VL序列构建单链可变区(single chain fragment variable，ScFv)的作用。这决定了重组CARs与抗原的结合可以不依靠MHC的递呈，这可以避免肿瘤细胞MHC表达下调这一免疫逃逸机制；跨膜区连接胞外抗原结合区和胞内信号区，一般由二聚体膜蛋白组成，主要包括CD3ζ、CD4、CD8、CD28等，能将CARs结构锚定于T细胞膜上。胞内信号区采用免疫受体酪氨酸活化基序(immune-receptor tyrosine-based activationmotifs，ITAM)，CARs接受肿瘤相关抗原(tumor-associated angtige，TAA)信息后，不直接传递信号，而是通过CD3或高亲和性受体Fc RI的胞内区使T细胞活化，活化后的T细胞分泌孔蛋白、颗粒酶及细胞因子协同作用杀死肿瘤细胞，发挥效应功能。免疫细胞治疗技术中的CAR-T疗法近年来发展非常迅速，通过基因改造的技术给T细胞加入嵌合抗体后，其靶向性、杀伤活性和持久性均较常规应用的T细胞有所提高。CAR-T技术不仅可以克服肿瘤局部免疫抑制微环境和打破宿主免疫耐受状态，还可以每次只靶向一种类型的肿瘤抗原，为肿瘤治疗带来了新的希望。

现有的嵌合抗原受体T淋巴细胞治疗(CAR-T)只是针对血液系统肿瘤，在实体瘤中的应用未见突破。具体原因多为：1、缺少特异性靶点；2、CAR-T细胞不能进入实体瘤内。本发明是在和肿瘤放疗联合解决了肿瘤的特异性靶点问题及实体瘤的屏障问题，是一种广谱的肿瘤细胞治疗方法。

发明内容

本发明的目的在于提出一种CAR-CXCL12 T淋巴细胞及其制备方法，通过基因芯片筛选靶点CXCR4，针对靶点CXCR4制备了其嵌合抗原受体CXCL12，感染制备T淋巴细胞，通过体外杀伤实验、荷瘤大鼠动物实验后显示了优越的抗肿瘤治疗的疗效且未发现明显的不良反应。同时，这是一种广谱的肿瘤细胞治疗方法。

本发明的技术方案是这样实现的：

本发明提供一种CAR-CXCL12修饰的T淋巴细胞，所述T细胞的表达靶向CXCR4的嵌合抗原受体为CAR-CXCL12，其基因序列见SEQ ID NO.1。

本发明进一步保护一种上述CAR-CXCL12修饰的淋巴T细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(A)提供一待改造的T淋巴细胞；和

(B)对所述的免疫细胞进行改造，从而使得所述的免疫细胞表达靶向CXCR4的嵌合抗原受体CAR-CXCL12，从而获得CAR-CXCL12修饰的T淋巴细胞。