[发明专利]一种结核分枝杆菌潜伏感染及发病的新型组合检测方法在审
| 申请号： | 202110633613.9 | 申请日： | 2021-06-07 |
| 公开（公告）号： | CN113355439A | 公开（公告）日： | 2021-09-07 |
| 发明（设计）人： | 黄高健 | 申请（专利权）人： | 深圳市普瑞康生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/32 |
| 代理公司： | 深圳市圳博友邦专利代理事务所(普通合伙) 44600 | 代理人： | 陈烈军 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市宝安区新*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 结核 分枝杆菌 潜伏 感染 发病 新型 组合 检测 方法 | ||
1.一种结核分枝杆菌潜伏感染及发病的新型组合检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤一：准备待测样品，并对待测样品进行活性检测，合格后进入下一步骤；
步骤二：将检测合格的待测样品利用罗氏培养基进行培养，收集全部培养物分别通过乙醇溶液浸泡；
步骤三：将步骤二中浸泡后的溶液等分多份，取其中任意一份进入步骤四内操作；
步骤四：取步骤三中一份侵泡溶液，并在室温风干，收集固形物干燥，对固形物干燥进行，并加入提取液混合，随后检测提取液中是否含有氨基酸序列为NSGYIECCR的结核分枝杆菌；
步骤五：将步骤四中检测的结核分枝杆菌的生物膜分离；
步骤六：通过酶标仪检测生物膜是否具有传染性。
2.根据权利要求1所述的一种结核分枝杆菌潜伏感染及发病的新型组合检测方法，其特征在于：在所述步骤一中的活性检测方法如下：
S1：将待测样品放置在玻璃培养皿中，并在培养皿中添加培养基，并培养10～15min；
S2：添加AlamarBlue氧化还原指示剂，并观察氧化状态下，样品增殖情况；
S3：观察添加AlamarBlue氧化还原指示剂后，样品颜色，摄入菌体内的AlamarBlue氧化还原指示剂被代谢中间体还原后释放到体外并溶于培养基中,使培养基从无荧光的靛青蓝变成有荧光的粉红色；
S4：使用普通分光光度计或荧光光度计进行检测，当吸光度和荧光强度与活性细菌数成正比时，说明样品合格，反之不合格。
3.根据权利要求1所述的一种结核分枝杆菌潜伏感染及发病的新型组合检测方法，其特征在于：还包括取步骤二中其中一份溶液，采用高保真DNA聚合酶和非高保真DNA聚合酶混合酶作为聚合酶,对结核分枝杆菌的DNA样品进行PCR扩增，并检测PCR扩增产物的形成与否，其中，如果形成扩增产物,则表示所述的结核分枝杆菌含有利福平耐药突变。
4.根据权利要求1所述的一种结核分枝杆菌潜伏感染及发病的新型组合检测方法，其特征在于：所述S1中加入的培养基为察氏培养基。
5.根据权利要求1所述的一种结核分枝杆菌潜伏感染及发病的新型组合检测方法，其特征在于：在所述S2中，观察样品增殖的时间为20～30min。
6.根据权利要求1所述的一种结核分枝杆菌潜伏感染及发病的新型组合检测方法，其特征在于：所述S4中，荧光基团选择FAM、ROX、HEX、CY5、TET、CAL-Fluor中的任意一种。
7.根据权利要求1所述的一种结核分枝杆菌潜伏感染及发病的新型组合检测方法，其特征在于：所述S1中的玻璃培养皿直径为10～15cm。
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