[发明专利]一种桃蛀螟活性抗菌肽及其基因、重组载体和应用

说明书

本发明属于基因工程领域，涉及一种抗菌肽，特别是指一种桃蛀螟活性抗菌肽及其基因、重组载体和应用。所述桃蛀螟活性抗菌肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。对玉米上重要真菌病害的病原物禾谷镰孢‑S、禾谷镰孢‑J、玉蜀黍平脐蠕孢、炭色长蠕孢、弯孢霉、拟轮枝镰孢和嘴突脐孢均具有抑制作用，平均抑制率为11.12%‑25.65%，其中对炭色长蠕孢和嘴突脐孢的抑制作用最强，本专利以目前农林生产上的重要害虫桃蛀螟为对象，研究了其体内具有活性的抗菌肽资源及其对玉米重要真菌病害的抑菌潜力，不仅变害为宝，更明确了昆虫抗菌肽在植物病害防治中的应用潜力。

技术领域

本发明属于基因工程领域，涉及一种抗菌肽，特别是指一种桃蛀螟活性抗菌肽及其基因、重组载体和应用。

背景技术

抗菌肽（Antimicrobial peptides, AMPs）是动物体为抵制外来病原物入侵而产生的免疫产物，主要是一类具有抗菌活性的多肽或小分子蛋白质，广泛存在于自然界中的多种生物体内。最早的抗菌肽是从昆虫的淋巴液和青蛙的表皮中分离得到的，现今已从包括人类在内的哺乳动物、昆虫、两栖类动物、植物、细菌及真菌等多种物种中分离出了抗菌肽。其来源途径广阔，根据本身结构和功能的差异，可将抗菌肽分为4类，分别为天蚕素类、防御素类、富含脯氨酸类和富含甘氨酸类。其作用机制也相当复杂，国内外有很多相关研究，目前认为抗菌肽的作用机制主要有3种：作用于细胞壁、作用于细胞膜和作用于细胞内靶点。抗菌肽的合成速度非常快，当生物体受到不明物入侵时能迅速合成抗菌肽第一时间杀伤入侵者，是许多生物先天非特异性防御系统的重要组成部分，因此抗菌肽是生物体的第一道天然免疫防线。

抗菌肽一般由20-60个氨基酸组成，其相对分子质量为2-7kDa，通常以阳离子形式存在，不仅对多种微生物具有抑制和杀伤作用，而且在生物体的免疫反应调节方面也具有一定的作用。具有抗菌谱广、强碱性、热稳定性、作用机制独特、不易产生耐药性等特点。因此，抗菌肽在农业、医疗、畜牧、食品及保健品等领域的开发研究与应用方面均有广泛的前景和价值。

昆虫作为动物界种类最多、数量最广的类群，其体内蕴含了大量宝贵的抗菌肽资源亟待开发。本专利以目前农林生产上的重要害虫桃蛀螟为对象，研究了其体内具有活性的抗菌肽资源及其对玉米重要真菌病害的抑菌潜力，不仅变害为宝，更明确了昆虫抗菌肽在植物病害防治中的应用潜力。

发明内容

本发明提出一种桃蛀螟活性抗菌肽及其基因、重组载体和应用，以目前农林生产上的重要害虫桃蛀螟为对象，研究了其体内具有活性的抗菌肽资源及其对玉米重要真菌病害的抑菌潜力，不仅变害为宝，更明确了昆虫抗菌肽在植物病害防治中的应用潜力。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种桃蛀螟活性抗菌肽，所述桃蛀螟活性抗菌肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

编码上述的桃蛀螟活性抗菌肽的基因。

所述基因的序列如SEQ ID NO.2所示。

含有所述的基因的重组载体。

所述重组载体的连接载体为pET32a（+）、宿主为大肠杆菌Rosetta-gamiB（DE3）。

上述的重组载体的制备方法，步骤如下：

（1）根据权利要求2所述的基因涉及引物对CPAlo-13768-F和CPAlo-13768-R；

（2）以桃蛀螟的cDNA为模板、以步骤（1）的引物对为引物进行PCR扩增；

（3）回收步骤（2）的扩增产物，转化至大肠杆菌感受态细胞，制得重组载体。

所述引物对CPAlo-13768-F和CPAlo-13768-R的序列分别如SEQ ID NO.3、SEQ IDNO.4所示。

利用上述的重组载体制备的抗菌肽。