[发明专利]酿酒酵母基因工程菌株及其构建方法和在酿酒中的用途有效

专利信息
申请号: 202110636049.6 申请日: 2021-06-08
公开(公告)号: CN113416664B 公开(公告)日: 2022-12-30
发明(设计)人: 陈叶福;石文琪;张果;李蕊蕊;陈艳芳;王欢;孙春虹;肖冬光;武晓乐;郭学武 申请(专利权)人: 天津科技大学
主分类号: C12N1/19 分类号: C12N1/19;C12N15/81;C12P7/62;C12R1/865
代理公司: 北京瑞盛铭杰知识产权代理事务所(普通合伙) 11617 代理人: 黄淑娟
地址: 300457 天津市滨*** 国省代码: 天津;12
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摘要:
搜索关键词: 酿酒 酵母 基因工程 菌株 及其 构建 方法 中的 用途
【权利要求书】:

1.一种酿酒酵母基因工程菌株,其特征在于,该工程菌株过表达乙醛脱氢酶基因ALD6和乙酰辅酶A合成酶基因ACS1,异源过表达醇酰基转移酶基因AeAT9

该工程菌株还过表达乙醇脱氢酶基因ADH2

所述工程菌株不表达负责胞浆丙酮酸到线粒体运输的孔蛋白基因POR2

其中,所述工程菌株的出发菌株为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CICC32315;

在所述酿酒酵母基因工程菌株中,乙酰辅酶A合成酶基因ACS1、醛脱氢酶基因ALD6和醇酰基转移酶基因AeAT9依次连接,并插入到酿酒酵母中半乳糖的转录调节因子的编码基因Gal80区,且将其替换;

乙醇脱氢酶基因ADH2的插入位点为酿酒酵母中乙酸异戊酯水解酶基因IAH1,且将其替换;

所述基因工程菌株负责胞浆丙酮酸到线粒体运输的孔蛋白基因POR2被敲除,

所述乙醛脱氢酶基因ALD6的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;所述乙酰辅酶A合成酶基因ACS1的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示;所述乙醇脱氢酶基因ADH2的核苷酸序列如SEQID NO:3所示;所述醇酰基转移酶基因AeAT9的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示;负责胞浆丙酮酸到线粒体运输的孔蛋白基因POR2的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示;所述编码基因Gal80的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示;所述乙醛脱氢酶基因ALD6连接有PGK1P强启动子序列如SEQ ID NO:7所示,GIC1T终止子序列如SEQ ID NO:8所示;所述乙酰辅酶A合成酶基因ACS1连接有TEF1P强启动子序列如SEQ ID NO:9所示,PGK1T终止子序列如SEQ ID NO:10所示;所述醇酰基转移酶基因AeAT9连接有PGK1P强启动子序列如SEQ ID NO:7所示,PGK1T终止子序列如SEQ ID NO:10所示;所述乙醇脱氢酶基因ADH2连接有HTX7P诱导型启动子序列如SEQ ID NO:11所示,PGK1T终止子序列如SEQ ID NO:10所示;所述乙酸异戊酯水解酶基因IAH1的核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示。

2.权利要求1所述的酿酒酵母基因工程菌株的构建方法,其特征在于,该方法包括:在酿酒酵母中引入醛脱氢酶基因ALD6、乙酰辅酶A合成酶基因ACS1、醇酰基转移酶基因AeAT9和乙醇脱氢酶基因ADH2,并且将负责胞浆丙酮酸到线粒体运输的孔蛋白基因POR2失活或敲除。

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