[发明专利]一种间充质干细胞在制备用于治疗膀胱过度活动综合症的药物中的应用

权利要求书

1.一种制备骨髓间充质干细胞药物的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)通过断颈法处死小鼠，将其浸泡于75％酒精里消毒5-10分钟后置于培养皿里，用剪刀从腹部沿冠状轴把皮肤剪开一个小口，从小口沿腰部剪一圈，再分别沿小鼠两条大腿腹股沟处将皮肤剪开，用镊子将小鼠腿部皮肤退至脚踝处，用镊子夹住小腿骨，用镊子将股骨与髌骨之间的肌腱分离，用剪刀将小腿骨靠近髌骨处剪断，分离股骨与其上包裹的肌肉，用剪刀在骶骨处剪断，将整条股骨与小鼠分离开，并迅速将股骨置于盛有磷酸盐缓冲液的培养皿里；用镊子把股骨上连接的肌肉剔除，置于一个新的盛有磷酸盐缓冲液的培养皿里，把盛有股骨的培养皿拿进生物安全柜；

(2)收集步骤(1)得到的培养皿中的股骨，将一个无菌筛置于管口处，用注射器先吸取1mL培养基待用，用无菌镊子夹取一根股骨，用剪刀将股骨两端剪开，右手换盛有培养基的注射器，将注射器针头插进股骨开口的一端，推动注射器将骨髓内容物吹至无菌筛上，使液体自然流到50mL管中，吹1-2mL之后换吹股骨另一开口端，直至吹至股骨发白即可；

(3)收集步骤(2)中的稀释骨髓，以1份淋巴细胞分离液(Ficoll分离液)加2份稀释骨髓的比例，将稀释骨髓缓慢加入Ficoll液面上，水平离心机20℃条件下2000r/min离心30分钟，从界面上取出的骨髓间充质干细胞用生理盐水洗涤2-3次后，加入培养基进行培养。

2.根据权利要求书1所述的一种制备骨髓间充质干细胞药物的方法，其特征在于，培养基由基础培养基、血清或血清替代物组成，基础培养基用于为间充质干细胞的生长提供必备的营养，基础培养基选自DMEM、EMEM、IMDM、GMEM、RPMI-1640或α-MEM中的一种，血清或血清替代物来自胎牛血清、血小板裂解物等。

3.根据权利要求书1所述的一种制备骨髓间充质干细胞药物的方法，其特征在于：使用10月龄以内大龄小鼠替代10-14天幼鼠分离骨髓间充质干细胞，优选的，8-10月龄大龄小鼠分离骨髓间充质干细胞，加入添加物得到接近幼鼠扩增能力的骨髓间充质干细胞；优选的，8-10月龄大龄小鼠和10-14天幼鼠骨髓共同分离培养得到扩增能力接近的骨髓间充质干细胞。

4.根据权利要求书3所述的一种制备骨髓间充质干细胞药物的方法，其特征在于，添加物成分剂量如下：0-500μM左旋肉碱、0-500μM硫辛酸、0-500μM吡咯并喹啉醌、0-20mM辅酶Q10、0-20mM褪黑素、0-20mM烟酰胺单核苷酸、50-200μM非必须氨基酸和0-100μM BMSC外泌体。

5.一种制备治疗膀胱过度活动综合症药物的方法，其特征在于，步骤如下：

S1、选择生物体上分离的间充质干细胞；

制备的间充质干细胞为骨髓来源，也可以是脐带、胎盘或脂肪的来源；

生物体来源于全龄段个体，包括年轻个体或者老龄个体；

S2、对间充质干细胞进行培养，培养基中加入添加物，其中对第1-2代细胞进行流式细胞检测合格后，将第3-5代细胞直接应用到治疗膀胱过度活动综合症药物中。

6.根据权利要求5所述的一种制备治疗膀胱过度活动综合症药物的方法，其特征在于：传代培养所得间充质干细胞转移至加入药用溶媒的离心管中离心，2000rpm离心5min，弃上清，加盐水溶液使细胞重悬，制得药物制剂。

7.一种治疗膀胱过度活动综合症的药物，其特征在于：药物包括间充质干细胞和药用溶媒；

药用溶媒包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、表面活性剂和润滑剂中的一种或几种。

8.根据权利要求7所述的一种治疗膀胱过度活动综合症的药物，其特征在于：药物选自注射剂、口服制剂或外用制剂，优选为注射剂；更为优选地，所述药物选自静脉注射剂、肌肉注射剂、皮下注射剂或鞘内注射剂。

9.根据权利要求8所述的一种治疗膀胱过度活动综合症的药物，其特征在于：静脉注射的用量为0.5-5μL/kg。