[发明专利]用于检测梨花粉枝枯病菌体系及其构建方法在审
| 申请号： | 202110638439.7 | 申请日： | 2021-06-08 |
| 公开（公告）号： | CN113308523A | 公开（公告）日： | 2021-08-27 |
| 发明（设计）人： | 冯宏祖;郝海婷;王兰;羊坚;谢伟 | 申请（专利权）人： | 塔里木大学;阿拉尔市铁漫植保服务有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686;C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京知呱呱知识产权代理有限公司 11577 | 代理人： | 杜立军 |
| 地址： | 843300 新疆维吾尔*** | 国省代码： | 新疆;65 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 检测 梨花 粉枝枯 病菌 体系 及其 构建 方法 | ||
1.一种用于检测梨花粉枝枯病菌体系，其特征在于，所述体系包括第一引物对、第二引物对和第三引物对，所述第一引物对、第二引物对和第三引物对先用于常规PCR，所述第一引物对和第二引物对再用于双重PCR；
其中，所述第一引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
所述第二引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
所述第三引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
2.如权利要求1所述的用于检测梨花粉枝枯病菌体系，其特征在于，
所述体系还包括Super Mix。
3.一种用于检测梨花粉枝枯病菌体系的构建方法，其特征在于，
所述方法包括：
利用权利要求1所述第一引物对、第二引物对和第三引物对进行常规PCR检测含有解淀粉欧文氏菌待测样品；
再用所述第一引物对和第二引物对进行双重PCR检测含有解淀粉欧文氏菌待测样品；
所述含有解淀粉欧文氏菌待测样品稀释7个浓度梯度。
4.如权利要求3所述的用于检测梨花粉枝枯病菌体系的构建方法，其特征在于，
所述7个浓度梯度分别为：2.7×107CFU/ml、2.7×106CFU/ml、2.7×105CFU/ml、2.7×104CFU/ml、2.7×103CFU/ml、2.7×102CFU/ml、2.7×101CFU/ml。
5.如权利要求3所述的用于检测梨花粉枝枯病菌体系的构建方法，其特征在于，
所述常规PCR反应体系为菌液菌液/稀释产物1μL、上游引物0.5μL、下游引物0.5μL、Super Mix 12.5μL、ddH2O 10.5μL。
6.如权利要求3所述的用于检测梨花粉枝枯病菌体系的构建方法，其特征在于，
所述常规PCR反应条件为：94℃3min，94℃30s，52℃30s；30个循环，72℃90s，72℃5min。
7.如权利要求3所述的用于检测梨花粉枝枯病菌体系的构建方法，其特征在于，
所述双重PCR反应体系为：菌悬液2μL、第一引物对上游引物0.5μL、第一引物对下游引物0.5μL、第二引物对上游引物0.5μL、第二引物对下游引物0.5μL、Super Mix 12.5μL、ddH2O 8.5μL。
8.如权利要求7所述的用于检测梨花粉枝枯病菌体系的构建方法，其特征在于，
所述双重PCR反应条件为：94℃3min，94℃30s，52℃30s；30个循环，72℃90s，72℃5min。
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