[发明专利]一种塞来昔布代谢标志物的检测试剂盒及其检测方法和应用

权利要求书

1.一种塞来昔布代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒检测塞来昔布代谢标志物基因位点CYP2C9*3的基因多态性，所述试剂盒包括CYP2C9*3扩增引物、CYP2C9*3测序引物和阳性对照。

2.根据权利要求1所述的塞来昔布代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述CYP2C9*3扩增引物如序列表SEQ ID NO:1～2所示。

3.根据权利要求1所述的塞来昔布代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述CYP2C9*3测序引物如序列表SEQ ID NO:3所示。

4.根据权利要求1所述的塞来昔布代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述测序引物为琼脂糖凝胶颗粒与氨基标记的DNA序列的结合物。

5.根据权利要求1所述的塞来昔布代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括扩增缓冲液、18mM醋酸镁、dNTPS、链置换DNA聚合酶、单链DNA结合蛋白、结合单链核酸的重组酶和海藻糖。

6.根据权利要求5所述的塞来昔布代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中各组分终浓度为：扩增前后引物各0.32uM，dNTPS 0.3mM，链置换DNA聚合酶1.2ng/μL，单链DNA结合蛋白3.2ng/μL，结合单链核酸的重组酶4.8ng/μL，海藻糖0.2％。

7.根据权利要求1所述的塞来昔布代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，CYP2C9*3测序引物对应的测序区域为CYP2C9*3待检序列，如序列表SEQ ID NO:4所示。

8.根据权利要求1所述的塞来昔布代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，CYP2C9*3待检序列对应CYP2C9*3分配指令如序列表SEQ ID NO:5所示。

9.一种采用权利要求1～8任一项所述的塞来昔布代谢标志物的检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：

a.将所述扩增反应液与5ul待测基因组DNA，采用RPA扩增进行扩增；

b.将10ul反应产物与3ul测序引物分别进行结合；

c.向每个测序管中加入测序酶和测序底物；

d.取一个dNTP排管，自圆滑一端向平端依次加入dATPαS、dTTP、dGTP、dCTP；

e.焦磷酸测序；

f.确定CYP2C9*3位点塞来昔布位点的基因型。

10.一种根据权利要求1～8任一项所述的塞来昔布代谢标志物的检测试剂盒的应用，其特征在于，所述检测试剂盒用于体外检测待测样本中的CYP2C9*3基因多态性。