[发明专利]一种华法林代谢标志物检测试剂盒及其检测方法和应用

权利要求书

1.一种华法林代谢标志物检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于检测华法林代谢标志物CYP2C9*3和VKORC1(G-1639A)的基因多态性，试剂盒包括如下组分：CYP2C9*3扩增引物、CYP2C9*3测序引物、VKORC1(G-1639A)扩增引物、VKORC1(G-1639A)测序引物和阳性对照。

2.根据权利要求1所述的华法林代谢标志物检测试剂盒，其特征在于，所述CYP2C9*3扩增引物如序列表SEQ ID NO:1～2所示。

3.根据权利要求1所述的华法林代谢标志物检测试剂盒，其特征在于，所述VKORC1(G-1639A)扩增引物如序列表SEQ ID NO:3～4所示。

4.根据权利要求1所述的华法林代谢标志物检测试剂盒，其特征在于，所述CYP2C9*3测序引物如序列表SEQ ID NO:5所示，VKORC1(G-1639A)测序引物如序列表SEQ ID NO:6所示。

5.根据权利要求1所述的华法林代谢标志物检测试剂盒，其特征在于，所述测序引物为琼脂糖凝胶颗粒与氨基标记的DNA序列的结合物。

6.根据权利要求1所述的华法林代谢标志物检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括扩增缓冲液、18mM醋酸镁、dNTPS、链置换DNA聚合酶、单链DNA结合蛋白、结合单链核酸的重组酶和海藻糖。

7.根据权利要求6所述的华法林代谢标志物检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中各组分终浓度为：CYP2C9*3扩增前后引物各0.3uM，VKORC1(G-1639A)扩增前后引物各0.4uM，dNTPS 0.3mM，链置换DNA聚合酶1.2ng/μL，单链DNA结合蛋白3.2ng/μL，结合单链核酸的重组酶4.8ng/μL，海藻糖0.2％。

8.根据权利要求1所述的华法林代谢标志物检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照，包括浓度为20ng/ul的CYP2C9*3、VKORC1(G-1639A)杂合型基因组DNA。

9.一种采用权利要求1～8任一项所述的华法林代谢标志物检测试剂盒的华法林代谢标志物检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤：

a.将所述扩增反应液与5ul待测基因组DNA，采用多重RPA扩增进行扩增；

b.将10ul反应产物与3ul测序引物分别进行结合；

c.焦磷酸测序；

d.确定CYP2C9*3位点和VKORC1(G-1639A)位点的基因型。

10.一种根据权利要求1～8任一项所述的华法林代谢标志物检测试剂盒的应用，其特征在于，所述检测试剂盒用于体外检测待测样本中的CYP2C9*3和VKORC1(G-1639A)基因多态性。