[发明专利]一株产热稳定和pH稳定细菌素的乳酸乳球菌及其筛选方法和应用

说明书

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株产热稳定和pH稳定细菌素的乳酸乳球菌及其筛选方法和应用。本发明乳酸乳球菌筛选自自然发酵的泡菜，命名为NCU036018，其16S rRNA序列SEQ ID：1所示，保藏编号为CGMCCNo.22077。本发明的乳酸乳球菌NCU036018产生的细菌素安全、无味、可生物降解、在pH 2‑10范围内能够同时抑制鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌，且在pH中性条件下经高温处理抑菌活性依然显著，相对于传统的化学、生物防腐剂(Nisin)更有优势，可广泛运用于发酵制品的制备和保藏。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株产热稳定和pH稳定细菌素的乳酸乳球菌及其筛选方法和应用。

背景技术

植物基发酵制品在制备和保藏过程中，多种潜在因素可导致染菌而引起食物中毒。金黄色葡萄球菌和鼠伤寒沙门氏菌是常见的食源性致病菌。其中，鼠伤寒沙门氏菌是引起急性胃肠炎的主要病原菌之一，若未及时治疗将引起败血症，即细菌侵入血液循环并在血中生长繁殖，产生毒素而引发急性全身性感染。在国标中制定了沙门氏菌的限量标准，规定肉制品、水产制品、粮食制品等所有11类食品，按照二级采样方案同批次采集5份样品，在被检的5份样品中，不允许任一样品检出沙门氏菌；金黄色葡萄球菌能够产生肠毒素引起食物中毒，由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒占食源性微生物食物中毒事件的25％左右，金黄色葡萄球菌成为排名第三的微生物致病菌，对人体肠道产生破坏导致呕吐腹泻等症状。在国标中制定了金黄色葡萄球菌的限量标准，规定肉制品、水产制品、粮食制品、即食豆类制品、即食果蔬制品、饮料、冷冻饮品及即食调味品等8类食品，按照三级采样方案同批次采集5份样品，每份样品中的金黄色葡萄球菌浓度均不得超出1000CFU/g(mL)，仅允许其中1份样品在100-1000 CFU/g(mL)之间。

目前植物基发酵制品主要依赖传统的苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸钾和乳酸链球菌素(Nisin)等防腐剂来抑制此类食源性病原菌。然而，由于苯甲酸、苯甲酸钠和山梨酸钾呈味、具低毒性，以及Nisin在pH中性条件下不耐热而使其使用受到限制。

发明内容

本发明的目的是提供一株产热稳定和pH稳定细菌素的乳酸乳球菌(L. lactis)及其筛选方法和应用，该菌为NCU036018，其产生的细菌素能够在pH 2-10范围内同时抑制鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌，且在pH中性条件下经高温处理抑菌活性依然显著，相对于传统的化学、生物防腐剂(Nisin)更有优势，可广泛运用于发酵制品的制备和保藏。

本发明提供一株产热稳定和pH稳定细菌素的乳酸乳球菌，该乳酸乳球菌筛选自自然发酵的泡菜，菌株为NCU036018，其16S rRNA序列如SEQ ID：1 所示，该乳酸乳球菌菌株已于2021年3月26日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，其简称为CGMCC，保藏编号为CGMCCNo.22077，分类命名为乳酸乳球菌Lactobacillus lactis。

本发明还提供一株产热稳定和pH稳定细菌素的乳酸乳球菌的筛选方法，包括如下步骤：

((1)培养：取泡菜样品液1mL用生理盐水进行梯度稀释，选取合适浓度梯度，涂布于MRS固体培养基上，37℃倒置培养46-50h；

(2)纯化：挑取步骤(2)培养基上具有不同形态的单菌落进行连续划线纯化培养；

(3)保存：挑取步骤(3)纯化好的单菌落于10mL MRS液体培养基中孵育22-25h，分别取培养液和50％的灭菌甘油各500μL按1:1(v/v)混合并保存于-80℃冰箱；

(4)活化：将步骤(3)分离保存的菌株接种到MRS液体培养基中，37℃活化22-25h，再以2％的接种量接种到MRS液体培养基中，37℃恒温培养22-25 h得到乳酸菌发酵液；