[发明专利]WHsAg单克隆抗体作为ELISA检测试剂的应用

说明书

本发明涉及抗WHsAg单克隆抗体作为ELISA检测试剂的应用，具体制备出适合WHsAg ELISA检测的抗WHsAg单克隆抗体，包括酶标抗体T9G10D4和包被抗体T1C3C9，并确定两者在WHsAg ELISA应用时的最佳使用浓度。对比改进前的检测方法，即使用抗WHsAg多克隆抗体，并采用生物素‑亲和素系统的检测方法，改进后的方法不仅可以优化检测流程，缩短检测时间，而且可以显著提高阳性样本的OD值，降低阴性样本的OD值，提升检测效果，这对于WHsAg ELISA试剂盒的制备具有重要应用价值，完善了WHV感染旱獭模型的基础研究工具。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及两种能运用于WHsAg ELISA检测的 单克隆抗体及其包被抗体和酶标抗体的最佳浓度。

背景技术

目前慢性乙型肝炎的治疗尚有许多问题有待解决，其相关研究离不开合 适的动物模型。土拨鼠肝炎病毒(woodchuck hepatitis virus,WHV)在病毒形态、 基因组结构、复制周期等方面与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)类似， WHV可以自然感染旱獭，且感染后的自然经过与HBV感染类似,因此旱獭是 研究HBV较为理想的动物模型。

嗜肝DNA病毒表面抗原(HBsAg、WHsAg)是嗜肝DNA病毒的外壳蛋白， 是嗜肝DNA病毒现症感染的标志。目前检测HBsAg已经商品化，包括用于人、 大鼠、小鼠、猪、豚鼠等ELISA试剂盒，但尚无商品化的WHsAg ELISA试剂 盒，其检测方法及所需试剂只能自己摸索和制备，本发明专利对于WHsAg ELISA试剂盒的制备具有重要应用价值。

发明内容

针对上述问题，本发明提供：

WHsAg单克隆抗体T9G10D4作为WHsAg ELISA酶标抗体，WHsAg单 克隆抗体T1C3C9作为WHsAg ELISA包被抗体，并确定两者在WHsAg ELISA 应用时的最佳使用浓度。

为了解决上述问题，本发明采用如下技术方案：

WHsAg单克隆抗体作为ELISA检测试剂的应用。

一种方式，其中，保藏号为CCTCC NO：C2019319的WHsAg单克隆抗 体T9G10D4作为WHsAg ELISA酶标抗体的应用。

一种方式，其中，WHsAg单克隆抗体T9G10D4作为WHsAg ELISA酶 标抗体的应用方法为，

多克隆抗体-抗WHsAb，稀释，包被ELISA板子；

取出已包被ELISA板子；

封闭孔板；

加入辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体T9G10D4，T9G10D4用稀释缓冲 液稀释，稀释比例分别为1:5000、1:10000、1:20000、1:40000、1:80000；

加入0.5‰过氧化氢和0.26‰四甲基联苯胺显色；

加入终止液，酶标仪OD450nm读数。

一种方式，其中，T9G10D4用稀释缓冲液稀释，稀释比例分别为1:5000、 1:10000、1:20000、1:40000、1:80000中任一。

一种方式，其中，单克隆抗体T9G10D4可作为酶标抗体，最佳稀释比例 为1:20000。

一种方式，其中，多克隆抗体-抗WHsAb采用7.2mg/ml，用包被缓冲液 稀释，稀释比例为1:720。

一种方式，保藏号为CCTCC NO：C2019318的WHsAg单克隆抗体 T1C3C9作为WHsAgELISA包被抗体的应用。