[发明专利]一种利用双歧杆菌的重组蛋白改善肠道炎症的方法

权利要求书

1.一种利用双歧杆菌的重组蛋白改善肠道炎症的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

（1）重组质粒的制备：将双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)H3-R2的基因组DNA作为PCR扩增GroEL和TAL基因的反应模板，并将表达质粒pQE-30双酶切，通过无缝克隆技术重组质粒；

（2）重组载体的诱导表达：将重组质粒pQE-30-GroEL和pQE-30-TAL导入大肠杆菌M15感受态，并加入IPTG至浓度为0.1mM进行诱导表达，分别在16℃和37℃诱导表达4h，并进行纯化浓缩；

（3）脂多糖诱导肠上皮细胞炎症模型的建立：肠上皮细胞株CCD 841CoN按每孔4×10⁵个细胞将细胞加到12孔板中进行培养，培养至细胞完全贴壁时，分别添加0、10、20、60、80μg/mL的LPS，继续培养48h，上清液用于测定IL-8的含量；

（4）重组蛋白对肠道炎症的作用：将LPS添加到CCD 841CoN细胞进行刺激的同时，分别加入不同浓度的GroEL和TAL，培养48h后，上清液用于检测炎症因子IL-8的含量；

所述重组载体的诱导表达为：当IPTG诱导表达时，温度为37℃诱导表达4h；所述重组蛋白纯化后浓缩的重组蛋白GroEL浓度高达0.86mg/mL，重组蛋白TAL浓度高达1.02mg/mL；所述LPS最佳添加量为20μg/mL；步骤（4）中所述GroEL和TAL的加入浓度分别为175μg/mL和125μg/mL；所述菌株H3-R2为实验室自行分离菌株，PCR扩增使用的GroEL和TAL基因序列均属实验室所有。