[发明专利]一种用于精准靶向肺肿瘤细胞的生物纳米递药系统及其制备方法、应用

权利要求书

1.一种用于靶向肺肿瘤细胞的生物纳米递药系统，其特征在于，所述生物纳米递药系统以肺肿瘤细胞外泌体作为载体，负载抗癌药物；所述载体为规则的茶托状结构，采用电穿孔的方式进行负载；所述的外泌体来源于肺肿瘤A549细胞，直径30-150nm；所述抗癌药物为吉非替尼（Gefitinib）；

所述抗癌药物在溶剂中的浓度为10μg/μL；所述药物与外泌体的质量比为1：1-10。

2.一种如权利要求1所述的生物纳米递药系统的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将肺肿瘤细胞于液氮中取出并复苏，待细胞传4-5代后，使用平皿、去血清外泌体的培养基培养细胞，待细胞长至80-85%后，收集上清液；将上清液使用差速离心的方法将大分子量的物质去除，将离心上清过滤膜除菌；

（2）使用超滤管对上清液进行浓缩，离心，使用缓冲液将沉淀重悬即得肺肿瘤A549外泌体备用；

（3）将抗癌药物使用溶剂溶解，将药物与外泌体混匀置于电转缓冲液中混匀进行电转导入，电转完成后将电转杯置于37℃培养箱，然后离心，使用缓冲液将其重悬即可。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述差速离心的具体参数为：4℃，300*g，10min；4℃，2000*g，10min；1000*g，30min。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述超滤管的规格为100KDa，转速为4000g*15min。

5.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述溶剂为DMSO；所述电转的条件为400V，1ms；所述缓冲液为PBS缓冲液。

6.一种如权利要求2-5任一项所述的制备方法制备的生物纳米递药系统中载药量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）使用高效液相色谱仪进行吉非替尼便准曲线的绘制；

（2）将载药外泌体进行超声破碎使外泌体膜破碎药物成为游离状态；

（3）上机检测上清中药物的浓度，计算外泌体包载药物的量。

7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于：所述高效液相色谱仪检测吉非替尼条件为250 mm× 4.6mm，5μm 的C18色谱柱；流动相为乙腈：醋酸铵缓冲液=40：60；检测波长为247 nm；柱温为 40 ℃；流速为1.0mL/min；进样体积为20 μL。

8.一种如权利要求2-5任一项所述的制备方法制备的生物纳米递药系统在制备抗癌药物中的应用。