[发明专利]红细胞叶酸的检测方法

说明书

本发明提供了红细胞叶酸的检测方法，所述方法包括：(1)红细胞准备程序，其中制成红细胞悬液，检测红细胞悬液的红细胞压积，或者制成红细胞裂解液，检测红细胞裂解液的血红蛋白浓度；(2)叶酸提取和检测，其中对叶酸提取所得上清液进行叶酸LC‑MS/MS检测，并根据标准品浓度计算出红细胞悬液或红细胞裂解液中叶酸的浓度；(3)叶酸浓度计算，其中根据以下公式计算叶酸浓度：红细胞叶酸浓度＝红细胞悬液中叶酸浓度/红细胞悬液的红细胞压积；或红细胞叶酸浓度＝红细胞裂解液中叶酸浓度/(红细胞裂解液血红蛋白浓度*0.0029)。经验证，本发明的检测有更高的准确度和临床价值。

技术领域

本发明涉及叶酸检测领域，具体而言，涉及红细胞叶酸的检测方法。

背景技术

叶酸水平与生殖健康密切相关。叶酸水平临床检测分血清(血浆)检测和红细胞检测两种。

目前血清(血浆)检测技术比较成熟，其检测方法有三种：微生物法、蛋白结合法和液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)。

微生物法利用乳杆菌生长速度对叶酸敏感的原理，通过测量经过一定时长生长后的细菌的浑浊度来反映培养液中添加的叶酸的浓度(Grossowicz,N.,et al.,Determination of folic acid metabolites in normal subjects and in patientswith nutritional megaloblastic anemia.Proc Soc Exp Biol Med,1962.109:p.770-3.)。

微生物法被临床营养学界公认为叶酸检测的金标准，常被新方法用来进行性能对比(Yetley,E.A.,et al.,Biomarkers of folate status in NHANES:a roundtablesummary.Am J Clin Nutr,2011.94(1):p.303S-312S)。微生物法的主要缺点是检测耗时长，一般需要3天时间，对无菌操作要求高，不利于商业推广。

自从上世纪70年代，基于蛋白结合原理的商业检测试剂盒得到广泛应用一直到今天。国际上主要的试剂盒厂家包括RocheFolate III和Beckman Coulter AccessFolate assay等，其检测主要是基于内源性叶酸和外源性标记的叶酸对叶酸结合蛋白的竞争性结合原理,利用化学发光产生信号的蛋白结合法(protein binding assay)。

近年来基于液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)的检测方法也逐渐被广泛用于血清叶酸检测，并显示出非常好的特异性和敏感度(Verstraete,J.,et al.,Clinicaldetermination of folates:recent analytical strategies and challenges.AnalBioanal Chem,2019.411(19):p.4383-4399.)。

血清学检测的主要缺点在于其反映的是近期叶酸摄入量，容易受一过性膳食因素的影响，波动性大，其浓度对避免出生缺陷的参考价值并没有得到学术界的广泛认可。WHO在一份预防神经管缺陷的营养学指南中指出育龄妇女的血清或血浆叶酸阈值对预防神经管缺陷是不充分的；红细胞叶酸浓度必须达到906nmol/L以上才能最大化的预防神经管缺陷(Cordero,A.M.,et al.,Optimal serum and red blood cell folate concentrationsin women of reproductive age for prevention of neural tube defects:WorldHealth Organization guidelines.MMWR Morb Mortal Wkly Rep,2015.64(15):p.421-3.)。