[发明专利]一种基于病毒样颗粒呈递冠状病毒受体结合区的冠状病毒亚单位疫苗

权利要求书

1.一种重组病毒样颗粒，其特征在于：所述重组病毒样颗粒为携带有特异蛋白的基孔肯雅病毒样颗粒；所述特异蛋白为SARS-CoV-2的S蛋白或SARS-CoV-2S蛋白的RBD区段。

2.根据权利要求1所述的重组病毒样颗粒，其特征在于：所述重组病毒样颗粒由基孔肯雅病毒的capsid蛋白、基孔肯雅病毒的E1蛋白、融合蛋白A和基孔肯雅病毒的6K蛋白自组装形成；

所述融合蛋白A含有基孔肯雅病毒的E2蛋白、E3蛋白和所述特异蛋白；

进一步地，所述特异蛋白替换基孔肯雅病毒的E3蛋白与E2蛋白之间的Furin酶切位点。

3.根据权利要求2所述的重组病毒样颗粒，其特征在于：所述融合蛋白A中还含有用于纯化的标签蛋白；

进一步地，所述标签蛋白为Flag标签；

更进一步地，所述融合蛋白A自N端到C端依次包括基孔肯雅病毒的E3蛋白、所述特异蛋白、基孔肯雅病毒的E2蛋白的N端区段、Flag标签和基孔肯雅病毒的E2蛋白的C端区段。

4.根据权利要求3所述的重组病毒样颗粒，其特征在于：其特征在于：所述融合蛋白A自N端到C端依次由基孔肯雅病毒的E3蛋白、柔性肽1、所述特异蛋白、柔性肽2、基孔肯雅病毒的E2蛋白的N端区段、柔性肽3、Flag标签、柔性肽4和基孔肯雅病毒的E2蛋白的C端区段组成。

5.如下任一生物材料：

P1、融合蛋白B，自N端到C端依次由基孔肯雅病毒的capsid蛋白、基孔肯雅病毒的E1蛋白、权利要求2-4任一中的所述融合蛋白A和基孔肯雅病毒的6K蛋白组成；

P2、编码P1中所述融合蛋白B的核酸分子；

P3、含有P2中所述核酸分子的表达盒、重组载体、重组细胞或重组菌。

6.根据权利要求5所述的生物材料，其特征在于：P3中所述重组载体为含有所述核酸分子的真核表达载体；

进一步地，所述重组载体为将所述核酸分子克隆到pcDNA3.1(+)载体后得到的重组质粒。

7.权利要求1-4中任一所述重组病毒样颗粒的制备方法，包括如下步骤：将权利要求6中所述的重组载体导入哺乳动物细胞，然后进行细胞培养，进而获得所述重组病毒样颗粒。

8.如下任一应用：

Q1、权利要求5或6所述生物材料在制备权利要求1-4中任一所述重组病毒样颗粒中的应用；

Q2、权利要求1-4中任一所述的重组病毒样颗粒或权利要求5或6所述生物材料在制备用于预防SARS-CoV-2感染所致疾病的产品中的应用。

9.一种用于预防SARS-CoV-2感染所致疾病的疫苗，其活性成分为权利要求1-4中任一所述的重组病毒样颗粒；

进一步地，所述疫苗中还含有佐剂，如铝佐剂；

更进一步地，所述铝佐剂为氢氧化铝佐剂。

10.根据权利要求1-9中任一所述的重组病毒样颗粒或生物材料或制备方法或应用或疫苗，其特征在于：所述SARS-CoV-2S蛋白的RBD区段的氨基酸序列如SEQ ID No.5的第325-518位所示；或者来源于SARS-CoV-2且与SEQ ID No.5的第325-518位所示的蛋白质具有98％以上同一性且具有相同功能的蛋白质；或者将SEQ ID No.5的第325-518位所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质；和/或

所述基孔肯雅病毒的capsid蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.5的第1-261位所示；或者来源于基孔肯雅病毒且与SEQ ID No.5的第1-261位所示的蛋白质具有98％以上同一性且具有相同功能的蛋白质；或者将SEQ ID No.5的第1-261位所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质；和/或

所述基孔肯雅病毒的E1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.5的第1022-1460位所示；或者来源于基孔肯雅病毒且与SEQ ID No.5的第1022-1460位所示的蛋白质具有98％以上同一性且具有相同功能的蛋白质；或者将SEQ ID No.5的第1022-1460位所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质；和/或

所述基孔肯雅病毒的6K蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.5的第960-1021位所示；或者来源于基孔肯雅病毒且与SEQ ID No.5的第960-1021位所示的蛋白质具有98％以上同一性且具有相同功能的蛋白质；或者将SEQ ID No.5的第960-1021位所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质；和/或

所述基孔肯雅病毒的E3蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.5的第262-321位所示；或者来源于基孔肯雅病毒且与SEQ ID No.5的第262-321位所示的蛋白质具有98％以上同一性且具有相同功能的蛋白质；或者将SEQ ID No.5的第262-321位所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质；和/或

所述基孔肯雅病毒的E2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.4的第326-747位所示；或者来源于基孔肯雅病毒且与SEQ ID No.4的第326-747位所示的蛋白质具有98％以上同一性且具有相同功能的蛋白质；或者将SEQ ID No.4的第326-747位所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质；和/或

所述Flag标签的氨基酸序列如SEQ ID No.5的第730-737位所示；和/或

所述基孔肯雅病毒的E2蛋白的N端区段的氨基酸序列如SEQ ID No.5的第523-725位所示；或者来源于基孔肯雅病毒且与SEQ ID No.5的第523-725位所示的蛋白质具有98％以上同一性且具有相同功能的蛋白质；或者将SEQ ID No.5的第523-725位所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质；和/或

所述基孔肯雅病毒的E2蛋白的C端区段的氨基酸序列如SEQ ID No.5的第742-959位所示；或者来源于基孔肯雅病毒且与SEQ ID No.5的第742-959位所示的蛋白质具有98％以上同一性且具有相同功能的蛋白质；或者将SEQ ID No.5的第742-959位所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质；和/或

所述柔性肽1的氨基酸序列如SEQ ID No.5的第322-324位所示；和/或

所述柔性肽2的氨基酸序列如SEQ ID No.5的第519-522位所示；和/或

所述柔性肽3的氨基酸序列如SEQ ID No.5的第726-729位所示；和/或

所述柔性肽4的氨基酸序列如SEQ ID No.5的第738-741位所示；

进一步地，所述融合蛋白A的氨基酸序列如SEQ ID No.5的第262-959位所示；或者与SEQ ID No.5的第262-959位所示的蛋白质具有98％以上同一性且具有相同功能的蛋白质；或者将SEQ ID No.5的第262-959位所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质；

更进一步地，权利要求5中所述融合蛋白B的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示；或者与SEQ ID No.5所示的蛋白质具有98％以上同一性且具有相同功能的蛋白质；或者将SEQ IDNo.5所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质；

和/或

在权利要求5的P2所述核酸分子中，编码所述基孔肯雅病毒的capsid蛋白的核酸分子如SEQ ID No.2的第1-783位所示；或者与SEQ ID No.2的第1-783位具有98％以上同一性且编码所述基孔肯雅病毒的capsid蛋白的DNA分子；和/或

在权利要求5的P2所述核酸分子中，编码所述基孔肯雅病毒的E1蛋白的核酸分子如SEQID No.2的第3064-4383位所示；或者与SEQ ID No.2的第3064-4383位具有98％以上同一性且编码所述基孔肯雅病毒的E1蛋白的DNA分子；和/或

在权利要求5的P2所述核酸分子中，编码所述融合蛋白A的核酸分子如SEQ ID No.2的第784-2877位所示；或者与SEQ ID No.2的第784-2877位具有98％以上同一性且编码所述融合蛋白A的DNA分子；和/或

在权利要求5的P2所述核酸分子中，编码所述基孔肯雅病毒的6K蛋白的核酸分子如SEQID No.2的第2878-3063位所示；或者与SEQ ID No.2的第2878-3063位具有98％以上同一性且编码所述基孔肯雅病毒的6K蛋白的DNA分子；

进一步地，权利要求5的P2所述核酸分子如SEQ ID No.2所示；或者与SEQ ID No.2具有98％以上同一性且编码所述融合蛋白B的DNA分子。