[发明专利]玉米干旱诱导表达基因ZmRD101启动子及其应用

权利要求书

1.一种玉米干旱诱导表达基因ZmRD101启动子，其核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。

2.一种用于获得权利要求1所述玉米干旱诱导表达基因ZmRD101启动子的引物对，其特征在于：所述引物对为：

正向引物P1：5’-TTCACTTTTTTAGTCTGGCAAT-3’；

反向引物P2：5’-GCTCACGGTTGCCTTG-3’。

3.一种权利要求1所述玉米干旱诱导表达基因ZmRD101启动子的获得方法，其特征在于：以具有玉米干旱特异表达基因ZmRD101的玉米基因组DNA为模板，采用以下引物对：

正向引物P1：5’-TTCACTTTTTTAGTCTGGCAAT-3’；

反向引物P2：5’-GCTCACGGTTGCCTTG-3’；

进行PCR扩增，其所获得的玉米干旱诱导表达基因ZmRD101启动子序列为SEQ IDNO.1所示。

4.根据权利要求3所述的获得方法，其特征在于：所述PCR扩增的反应体系：

所述PCR反应条件：95℃预变性3min；95℃变性30sec；60℃退火30sec；72℃延伸75sec；循环35次后；72℃延伸5min。

5.一种重组表达载体，其特征在于：它为含有权利要求1所述玉米干旱诱导表达基因ZmRD101启动子的植物表达载体。

6.根据权利要求5所述重组表达载体，其特征在于：所述植物表达载体为pZZ01523。

7.一种权利要求5所述重组表达载体的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）以玉米B73自交系干旱诱导表达基因ZmRD101启动子序列为模板设计引物对，如下：

RD101-F：5’-CCTGTCAAACACTGATAGTTTTTCACTTTTTTAGTCTGGCAAT-3’，

RD101-R：5’-CCGGGATACTAGTGCGTTTAAACGCTCACGGTTGCCTTG-3’；

2）以玉米干旱诱导表达基因ZmRD101序列为模板进行PCR，得到基因PCR产物；其中，PCR扩增条件如下：

反应体系：

2x phanta Buffer	10ul
dNTP	0.4ul
正向引物P1	0.8ul
反向引物P2	0.8ul
Phanta max	0.4ul
cDNA	1.5ul
2O]]>	6.9ul

所述PCR反应条件：95℃预变性3min；95℃变性30sec；60℃退火30sec；72℃延伸75sec；循环35次后；72℃延伸5min；

3）线性化载体制备：使用限制性内切酶PMEI单酶切pZZ01523载体，使环状载体线性化；

4）将载体线性化与酶切的基因PCR产物进行同源重组，得到重组产物；

5）重组产物转化：重组产物转化DH5α感受态细胞，检验得到重组表达载体。

8.一种下述各项之一在启动目的基因表达和培育植物新品种中的应用，

1）权利要求1所述的启动子；

2）权利要求5所述的重组表达载体。