[发明专利]一种光活化荧光探针及其制备方法及应用

权利要求书

1.一种通式(Ⅰ)所示的化合物，其特征在于，其结构如下所示：

其中，R为乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧羰基、苄氧羰基、烯丙氧羰基、苄基、对甲氧基苄基、C1-C10烷基、三苯甲基、对甲苯磺酰基。

2.如权利要求1所述的通式(Ⅰ)所示的化合物，其特征在于，R为乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧羰基、苄氧羰基、烯丙氧羰基、苄基、对甲氧基苄基、甲基、乙基、烷基、三苯甲基、对甲苯磺酰基。

3.如权利要求1所述的通式(Ⅰ)所示的化合物，其特征在于，其中通式(Ⅰ)的化合物选自化合物：

4.如权利要求1所述的通式(Ⅰ)所示的化合物的互变异构、对映异构体、对映体、非对映体、消旋体、同位素化合物、及各种形式的盐或其水合物。

5.一种如权利要求4所述的通式(I)所示的化合物的制备方法，其特征在于，所述方法如下：

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

步骤1-1：将4-氟-2-羟基苯甲醛溶于二甲基亚砜中，加入哌嗪-1-羧酸叔丁酯，升温至100℃反应；TLC监测反应完全后，加入饱和碳酸钾溶液，乙酸乙酯萃取，依次用水，饱和氯化钠溶液洗涤；合并有机相，干燥，浓缩，柱层析；得到黄色固体1-B；

步骤1-2：将化合物1-B溶于乙腈中，加入乙酰乙酸乙酯、乙酸、哌啶，升至80℃反应；TLC监测反应完全后，向反应液中加入水，乙酸乙酯萃取，依次用水，饱和氯化钠溶液洗涤；合并有机相，干燥，浓缩，柱层析；得到黄色固体1-C；

步骤1-3：将化合物1-C溶于四氢呋喃中，分批加入苯基三甲基三溴化铵，TLC监测反应完全后，向反应液中加入水，乙酸乙酯萃取，依次用水，饱和氯化钠溶液洗涤；合并有机相，干燥，浓缩，柱层析；得到黄色固体1-D；

步骤1-4：化合物1-D溶于二氯甲烷中，加入三苯基膦、碘化钾，升温至40℃反应；LC-MS监测反应完全后，向反应液中加入水，乙酸乙酯萃取，依次用水，饱和氯化钠溶液洗涤；合并有机相，干燥，浓缩，用于下一步反应；

步骤1-5：将上一步粗品重溶于二氯甲烷中，加入饱和碳酸钾溶液，室温下剧烈搅拌；TLC监测反应完全后，向反应液中加入水，乙酸乙酯萃取，依次用水，饱和氯化钠溶液洗涤；合并有机相，干燥，浓缩，柱层析；得到黄色固体1-E；

步骤1-6：化合物1-E溶于二氯甲烷中，加入3-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-硝基苯甲醛，室温反应，TLC监测反应完全后，向反应液中加入水，乙酸乙酯萃取，依次用水，饱和氯化钠溶液洗涤；合并有机相，干燥，浓缩，柱层析；得到橘红色固体1-F；

步骤1-7：将化合物1-F溶于二氯甲烷中，加入三氟乙酸，室温反应，TLC监测反应完全后，浓缩，直接用于下一步反应；

步骤1-8：将上一步粗品溶于二氯甲烷中，0℃下逐滴加入三乙胺、氯乙酰，升至室温反应；TLC监测反应完全后，向反应液中加入饱和氯化铵溶液，乙酸乙酯萃取，依次用水，饱和氯化钠溶液洗涤；合并有机相，干燥，浓缩，柱层析；得到橘红色固体化合物1，即所述通式(I)所示的化合物。

7.一种如权利要求1～3之任一项所述的通式(Ⅰ)所示的化合物或如权利要求4所述的通式(Ⅰ)所示的化合物的互变异构、对映异构体、对映体、非对映体、消旋体、同位素化合物、及各种形式的盐或其水合物在制备光活化荧光激发探针或光诱导的多功能交联剂中的应用。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述光活化荧光激发探针用于对生物大分子进行荧光标记。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述光活化荧光激发探针用于对蛋白质进行荧光标记。

10.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述光活化荧光激发探针用于对活体细胞、活体组织、离体细胞或离体组织进行荧光成像。