[发明专利]包含外源抗原的人巨细胞病毒

说明书

本发明涉及包含外源抗原的人巨细胞病毒.公开了包含异源抗原的人巨细胞病毒载体.来源于TR毒株的载体是更昔洛韦敏感的，包含活性US2、US3、US6、US7和UL131A基因，并且在UL82基因中具有阻止pp71表达的有害或失活突变。

本申请是申请号为201580045987.1的中国专利申请的分案申请，原申请是2015年7月16日提交的PCT国际申请PCT/US2015/040807于2017 年2月27日进入中国国家阶段的申请.

相关申请的交叉引用

本申请要求于2014年7月16日提交的题为HUMAN CYTOMEGALOVIRUS COMPRIZINGEXOGENOUS ANTIGENS的美国临时申请No.62/025,348的优先权，其公开内容通过引用整体并入本文.

技术领域

总体来说，所述领域涉及疫苗平台.更具体地，所述领域涉及表达外源抗原的重组人巨细胞病毒载体.

背景技术

动物实验已经证明，载有巨细胞病毒(CMV)的疫苗是独特的，因为它们：a)诱导并维持高频率的超淋巴样T细胞(extralymphoid T cell)应答(所谓的效应记忆性T细胞)；b)超感染CMV阳性宿主；以及c)即使当宿主向宿主(host-to-host)扩散缺陷时仍保持免疫原性.此外，动物模型中的实验已经表明，来源于动物CMV的疫苗载体诱导针对感染性疾病和癌症的保护性免疫应答(US 20080199493；US 20100142823；US 20130136768和US20140141038；所有这些通过引用并入本文).特别引人注目的是以下发现：载有恒河猴CMV(RhCMV)的猴免疫缺陷病毒(S1V)疫苗不仅能够预防非人灵长类动物中的AIDS，而且能够最终治愈这些动物的SIV(Hansen SG等，Nature 502，100-104(2013)；通过引用并入本文)。

在巨细胞病毒疫苗的开发中使用减毒株(attenuated strain)是重要的，因为未弱化的毒株可以从宿主向宿主扩散，并且至少在免疫受损个体中可能是病理性的.之前，弱化的人CMV(HCMV)毒株未能a)建立潜伏感染(Plotkin SA和Huang ES，J Infect Dis 152，395-397(1985)；通过引用并入本文)；b)诱导长持续时间的免疫力(Jacobson MA等，J ClinVirol 35，332-337(2006)；通过引用并入本文)；c)再次感染显著比例的之前已被CMV天然感染过的群体(Heineman TC等，JInfect Dis 193，1350-1360(2006)，通过引用并入本文)；或d)产生持续感染(WO2013/036465，通过引用并入本文).此外，当在成纤维细胞中生长时，HCMV基因组的临床毒株在体外高度不稳定，导致成纤维细胞适应(adaptation)，例如UL131A的缺失.

这样的适应对组织培养物在体内执行载体功能能力的影响大多是未知的.除了需要弱化以在体外和体内稳定之外，重要的是这些载体可以被制造为具有可重现的结果。最稳定的弱化策略是基因缺失.然而，这通常需要产生互补细胞系(complementing cellline)，这对用于生长巨细胞病毒的原代细胞来说是难以实现的.

发明内容

本文公开了来自HCMV-TR3的严重弱化、扩散缺陷(即，细胞向细胞扩散缺陷)的载体，HCMV-TR3是HCMV TR毒株的遗传修饰形式. 所公开的载体建立并维持持续感染，诱导并维持针对异源抗原的效应记忆 T细胞，并再次感染CMV血清阳性宿主.所述载体包含异源抗原，例如非CMV病原体特异性抗原或肿瘤抗原.

特别地，将TR3工程化为更昔洛韦敏感的.在一个实例中，这是由于添加了活性UL97基因(其在TR3的原始临床分离株中突变)。将TR3 进一步工程化以包含活性US2、US3、US6和US7基因，这些基因在TR3 的原始临床分离株的BAC克隆期间被移除。TR3的另外的形式包括编码 pp71之UL82基因中的有害(即失活)突变，其在本文中可以称为 TR3Δpp71或另称为TR3ΔUL82.