[发明专利]在线脱色透明大体积样本并获取三维数据的方法

权利要求书

1.在线脱色透明大体积样本并获取三维数据的方法，其特征在于：包括如下步骤：

S1、第一次浸没步骤，将生物样本组织浸入成像溶液中进行第一次浸没处理，浸没时间至少24小时，得到第一次浸没处理后的生物样本组织；

S2、包埋步骤，将经过步骤S1处理后的生物样本组织进行琼脂糖包埋，得到包埋后的生物样本组织；

S3、第二次浸没步骤，将经过步骤S2包埋后的生物样本组织再次浸泡于所述成像溶液中，浸没时间至少24小时；将经过第二次浸没后的生物样本组织进行切片成像，

其中所述成像溶液包括如下质量百分比的原料：

20%-40%的糖或醇或糖醇类化合物；

10%-30%的尿素；

0%-30%的促渗剂；

5%-10%的氨基醇类化合物；

0%-0.5%的表面活性剂，其余为水。

2.根据权利要求1所述的在线脱色透明大体积样本并获取三维数据的方法，其特征在于：所述氨基醇类化合物为N-甲基二乙醇胺或N,N,N',N'-四(2-羟基丙基)乙二胺的一种或几种。

3.根据权利要求1所述的在线脱色透明大体积样本并获取三维数据的方法，其特征在于：所述表面活性剂为3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐、曲拉通X-100、十二烷基硫酸钠中的一种或几种。

4.根据权利要求1所述的在线脱色透明大体积样本并获取三维数据的方法，其特征在于：所述促渗剂选自二甲基亚砜或丙二醇的一种或几种。

5.根据权利要求1所述的在线脱色透明大体积样本并获取三维数据的方法，其特征在于：所述糖为果糖、葡萄糖、蔗糖的一种或多种；所述醇为甘油、聚乙二醇的一种或多种；所述糖醇类化合物为山梨醇、木糖醇的一种或多种。

6.根据权利要求1所述的在线脱色透明大体积样本并获取三维数据的方法，其特征在于：所述步骤S2具体包括将所述生物样本组织浸入具有琼脂糖溶液的模具中，将模具保持在45-55℃的温度区间，使得所述生物组织样本与所述琼脂糖溶液充分接触并交联至少30分钟，再取出模具自然冷却后取出包埋后的所述生物样本组织。

7.根据权利要求1所述的在线脱色透明大体积样本并获取三维数据的方法，其特征在于：所述“将经过第二次浸没后的生物样本组织进行切片成像”具体包括，

S4、样本安装步骤，将经过步骤S3第二次浸没后的生物样本组织固定于样本槽内，并将所述样本槽固定于三维移动平台上；在所述样本槽中倒入所述成像溶液直至淹没所述生物样本组织、显微物镜、用于切削的刀具，透明、脱色所述生物样本组织的浅层表面；

S5、光学成像步骤，移动三维移动平台将生物样本组织移动至物镜下，控制光学显微成像模块对所述生物样本组织的浅层表面进行显微光学成像，并存储所得到的图像；

S6、切片步骤，将所述生物样本组织在所述成像溶液中进行切片，使所述成像溶液实时透明化经切片后新暴露的所述生物样本组织的表面；

循环交替进行S5和S6，直至获得所述生物样本组织的三维图像。

8.根据权利要求7所述的在线脱色透明大体积样本并获取三维数据的方法，其特征在于：所述步骤S5中的最大切削次数为N=H/d，H为样本高度，d为切片厚度，所述切片厚度d为20-100um。

9.根据权利要求1所述的在线脱色透明大体积样本并获取三维数据的方法，其特征在于：在循环交替进行步骤S5和S6时，所述步骤S6之前还包括一个检测步骤，检测切片次数是否达到最大切削次数，若达到最大切削次数，则完成整个数据采集。