[发明专利]一种基于斑马鱼模型对莨菪类药物进行毒性评价的方法

说明书

本发明公开了一种基于斑马鱼模型对莨菪烷烃类药物进行毒性评价的方法，包括：(1)配制莨菪类药物溶液；(2)采用所述的莨菪类药物溶液对斑马鱼胚胎、斑马鱼幼鱼和斑马鱼成鱼进行处理，获得毒性反应结果；所述毒性反应结果包括斑马鱼幼鱼胚胎发育毒性结果，斑马鱼幼鱼行为学毒性结果和斑马鱼成鱼行为学毒性结果；(3)根据所述毒性反应结果得到莨菪类药物的毒性数据。

技术领域

本发明属于毒物分析领域，具体涉及一种基于斑马鱼模型对莨菪烷烃类药物进行毒性评价的方法。

背景技术

莨菪烷类生物碱是一类具有较强生理活性的天然产物，目前在医药学上占有重要的地位。我国具有丰富的莨菪烷类生物碱的动植物资源，并且投入应用的生物碱种类数量较大，其中包括天然存在的生物碱与人工合成的衍生物。其在医疗上应用十分广泛，例如阿托品、东莨菪碱、山莨菪碱和樟柳碱等莨菪烷生物碱药品，是医疗机构最常用的药物之一，有扩瞳、解痉、抑制中枢、兴奋呼吸、活跃微循环和解磷毒等诸方面的作用。作为药物的同时，部分莨菪烷烃类生物碱的毒性较强，过量使用会出现昏迷乃至死亡的现状，甚至被应用于犯罪，中毒症状一般会出现幻觉、痉挛等，而目前中毒的鉴定以及评价技术还不成熟，对莨菪烷类生物碱对生物的负面效应同样不是很清晰，所以建立一种合理的药物毒性评价体系至关重要。

发明内容

本发明提供了一种基于斑马鱼模型对莨菪烷烃类药物进行毒性评价的方法，该方法能够利用斑马鱼幼鱼和成鱼综合评价莨菪烷烃类药物毒性大小。

本发明的技术方案如下：

一种基于斑马鱼模型对莨菪类药物进行毒性评价的方法，包括以下步骤：

(1)配制莨菪类药物溶液；

(2)采用所述的待测样对斑马鱼胚胎、斑马鱼幼鱼和斑马鱼成鱼进行处理，并进行毒性评价；

所述毒性反应结果包括斑马鱼幼鱼胚胎发育毒性结果，斑马鱼幼鱼行为学毒性结果和斑马鱼成鱼行为学毒性结果；

(3)根据所述毒性反应结果得到莨菪类药物的毒性数据。

所述的毒性评价包括(a)斑马鱼幼鱼胚胎发育毒性评价；(b)斑马鱼幼鱼行为学毒性评价,采集斑马鱼幼鱼的自发运动情况，并进行行为学数据处理；(c)斑马鱼成鱼行为学毒性评价,采集斑马鱼成鱼的自发运动情况，并进行行为学数据处理。

作为优选，所述的斑马鱼幼鱼为鱼龄为6天的斑马鱼，斑马鱼成鱼为鱼龄为6个月的斑马鱼。

作为优选，步骤(1)中，待测莨菪烷烃类药物包括：(-)莨菪碱、阿托品、东莨菪碱、(-)东莨菪碱氢溴酸盐、消旋山莨菪碱、氢溴酸樟柳碱、α-托品醇和莨菪亭。

作为优选，步骤(2)中，在显微镜下观察记录各实验组斑马鱼心脏、脑部、耳、下颌、眼、肝脏、肠道、躯干/尾/脊索、肌肉/体节、鳍、体长、身体着色、循环系统、身体水肿和出血等毒性反应情况，统计各实验组的毒性发生率，并对典型毒性器官进行拍照。

作为优选，步骤(2)中，采集斑马鱼幼鱼的自发运动情况，在全暗环境下和明暗交替环境下进行。

作为进一步的优选，步骤(2)中，DanioVision高通量鱼类行为跟踪系统中，采用Ethovision XT10.0软件追踪采集40min内斑马鱼幼鱼的自发运动情况。

作为优选，步骤(2)中，所述的明暗交替环境下具体为：5min全亮环境，然后5min全暗环境，重复循环2次。

作为优选，步骤(2)中，所述的自发运动情况包括游动轨迹、游动平均距离、游动最大速度、最大加速度、形态变化、死亡特征点。

作为优选，步骤(2)中，采集斑马鱼成鱼的自发运动情况，在全亮环境下进行。