[发明专利]一种胆红素的提取方法及其应用

说明书

本发明涉及了一种胆红素的提取方法以及在尿试纸中的应用，属于医药试剂技术领域，包括以下步骤：步骤1：准备新鲜动物内脏器官；步骤2，对新鲜动物器官进行反复清洗和去杂质；步骤3：处理样本剪碎后进行细打碎；步骤4：经过盐稀进行粗提取；步骤5：冻干；步骤6：在目标胆红素中添加稳定剂保存。本发明的提取胆红素方法操作简便、成本低，得到浓度高、纯度高的胆红素，胆红素可以应用在尿试纸中。

技术领域

本发明属于医药试剂技术领域，具有涉及一种高效提取胆红素的工艺及在尿试纸中的应用。

背景技术

胆红素其提取来源主要由动物的胆囊中提取，是由动物体内的血红蛋白分解代谢的还原产物，与化学方法人工合成胆红素相比，动物体内提取胆红素具有安全性高、代谢稳定等优势，但是动物天然产物的提取获得则存在不同程度的缺陷。目前，对胆红素的提取主要采用钙盐法、树脂法、快速法等提取方式。主要技术有物理吸附、超临界萃取技术等。

钙盐法，经过钙盐沉淀，在经过酸化形成游离状态，用氯仿萃取后，再经过有机溶剂进行重结晶，得到待提取物质。优点在于成本低，要求低，对于提取工艺中注意事项如下几点即可：1.提取工艺中要使酸化充分完成，加盐酸的过速度不宜过快，2.氧化剂含量不应超过原料总量1%，3.注意有机溶剂混合后静置时长。但工艺较复杂，生产周期长，提取率一般。

树脂法，采用大孔吸附树脂这一类有机高聚吸附剂，一般为白色球状颗粒。将待提取成分用碱水解成可溶性阳离子溶液，再经过大孔径树脂或阴离子交换树脂进行吸附。优点在于理化性质稳定，操作简单，但不适合长时间操作，试剂消耗大，提取成本高，不适合工业化生产。

快速法主要以超临界萃取技术为主，具有萃取效率高，自动化程度高、溶剂用量少优点。在较高温度下增加待测物的溶解度。提高压力使低沸点的溶剂在高温下保持液态，使其溶解力增加，高温时间短使得其热降解程度低，保证提取率。但具有一定局限性，会不耐高温的成分严重失活，对温度把控要求严格，不适合工业化生产。

发明内容

本发明的目的在于提供一种操作简便、成本低、浓度高、纯度高的胆红素的提取工艺及应用在尿试纸中。

本发明提供的一种胆红素的提取方法，步骤为 ：

(1)准备：准备新鲜动物胆囊器官（宰杀1-3小时以内）；

(2)预处理：将新鲜动物胆囊用0-4℃的纯化水反复冲洗5次，然后除去脂肪、外膜、血管等杂质，取出其中胆汁；

(3)处理样本：将（2）中样本反复离心，使用11000r/min离心25min，滤布过滤，放置与常温静置24-48h；

(4)粗提取：将（3）样本对其进行盐析。利用磁力搅拌器对其进行溶解，溶解8h-24h。常温放置12-24h。然后进行离心，使用11000r/min离心25min，过滤。即得到胆红素；

(5)冻干：对（4）得到样本进行冻干，冻干约40-48h；

(6)保存：向（5）中添加稳定剂。

本发明新鲜动物来源为猪、羊、牛、鸡中的一种。

本发明的盐析所用的盐为氯化钠、硫酸铵、氯化钙、氯化镁中的一种或多种组成，浓度为0.05-300g/L。

本发明的稳定剂为海藻糖、甘露醇、甘油、葡萄糖、叠氮钠、AES中的一种或两种。

本发明含有上述胆红素的尿液分析校准品，校准品包括胆红素、尿酸、醋酸钠、表面活性剂、防腐剂等。

本发明中尿酸浓度为0.01-0.1%w/v。

本发明中醋酸钠浓度为0.1-0.25%w/v。

本发明的表面活性剂为吐温系列、曲拉通系列中的一种，浓度为1-10mL/L。

本发明的防腐剂为叠氮钠、牛白蛋白、PC300中的一种，浓度为1-10ml/L。