[发明专利]在免疫球蛋白重链编码序列中具有DH-DH重排能力的非人动物

权利要求书

1.一种包含工程化重链多样性(D_H)基因区段的核苷酸分子，所述工程化重链多样性基因区段包含有效地连接至23聚体重组信号序列(RSS)的至少一个D_H基因区段。

2.一种核苷酸分子，其从5'至3'在有效连接中包含：

(a)一个或多个未重排的人V_H基因区段；

(b)从5'至3'包含以下项的工程化D_H区

(i)一个或多个未重排的人D_H基因区段，其中所述一个或多个人D_H基因区段中的每一个在其5’和3'端侧接有12聚体RSS，以及

(ii)包含在其5'端有效地连接至23聚体RSS的人D_H3-3基因区段的有效地连接至23聚体RSS的至少一个D_H基因区段；和

(c)一个或多个未重排的人J_H基因区段。

3.一种核苷酸分子，其从5'至3'在有效连接中包含：

(a)一个或多个未重排的人V_H基因区段；

(b)工程化D_H区，其中所述工程化D_H区从5'至3’包含

(i)有效地连接至23聚体RSS的至少一个D_H基因区段，包括在其3'端有效地连接至23聚体RSS的至少一个人D_H2基因区段，任选地其中在其3'端有效地连接至23聚体RSS的所述至少一个人D_H2基因区段包含在其3'端有效地连接至23聚体RSS的人D_H2-2基因区段、在其3'端有效地连接至23聚体RSS的人D_H2-8基因区段、在其3'端有效地连接至23聚体RSS的人D_H2-15基因区段、或其任何组合，以及

(ii)一个或多个人D_H基因区段，其中所述一个或多个人D_H基因区段中的每一个在其5'端和3'端侧接有12聚体RSS；和

(c)一个或多个未重排的人J_H基因区段。

4.一种修饰免疫球蛋白重链可变区以工程化D_H-D_H重组的方法，所述方法包括：

获得包含含有一个或多个未重排的D_H基因区段的D_H区的免疫球蛋白重链可变区，所述未重排的D_H基因区段中的每一个在一侧侧接有12聚体RSS且在另一侧侧接有另一个12聚体RSS，和

修饰所述D_H区以还包含有效地连接至23聚体RSS的至少一个D_H基因区段。

5.一种包含免疫球蛋白重链可变区的啮齿动物种系基因组，所述免疫球蛋白重链可变区包含：

(i)未重排的重链可变(V_H)基因区段，

(ii)工程化重链可变区多样性(D_H)区，其中所述工程化D_H区包含一个或多个种系D_H基因区段和有效地连接至23聚体重组信号序列(RSS)的一个或多个D_H基因区段，以及

(iii)未重排的重链连接(J_H)基因区段，

其中(i)-(iii)处于有效连接中，使得在重组后所述免疫球蛋白重链可变区包含编码免疫球蛋白重链可变结构域的重排的重链可变区序列，任选地其中所述重排的重链可变区序列在V_H(D_H-D_H)J_H重组事件之后形成。

6.一种啮齿动物基因组、核酸或免疫球蛋白基因座，其包含有效地连接至啮齿动物重链恒定区基因序列的重排的重链V_H(D_HA-D_HB)J_H编码序列，任选地其中由于D_HA和D_HB中的每一个分别显示与第一和第二种系D_H基因区段具有40％的同一性、最多1个核苷酸突变，所以所述重排的重链在体细胞上是超突变的和/或被确定为是V_H(D_HA-D_HB)J_H编码序列。